63ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 5. Genética Vegetal

EMBRIOGÊNESE SOMÁTICA A PARTIR DE EMBRIÕES ZIGÓTICOS EM Passiflora cincinnata MASTERS

Suzam Lenni da Silva Pereira 1 Tatiane Lemos Varella 1 Viviane Luiza Hunhoff 1 Acsa Borghetti Silva 1 Daniela Lopes Paim Pinto 2 Maurecilne Lemes da Silva 1

1. Depto. de Ciências Biológicas, Universidade do Estado de Mato Grosso-UNEMAT 2. Depto.de Ciências Biológicas, Universidade do Estado de Mato Grosso-UNEMAT 3. Depto.de Ciências Biológicas, Universidade do Estado de Mato Grosso-UNEMAT 4. Depto.de Ciências Biológicas, Universidade do Estado de Mato Grosso-UNEMAT 5. Doutoranda na Scuola Superiori Sant’Anna, Pisa/Itália 6. Profa. Dra./Orientadora - Depto.de Ciências Biológicas-UNEMAT

INTRODUÇÃO:

O avanço da cultura do maracujazeiro no Brasil, impulsionado pela indústria de suco e a crescente demanda de fruta fresca, acarreta o surgimento de problemas em particular de ordem fitossanitária (FILHO, 2002). A espécie Passiflora cincinnata (2n=2x=18) é popularmente conhecida como maracujá-mochila ou maracujá-do-mato, de flores violetas muito vistosas (OLIVEIRA & RUGGIERO, 2005) e apresenta resistência à doença da parte aérea causada pela bactéria Xanthomonas axonopodis f. sp. passiflorae (VIEIRA & CARNEIRO, 2004). É considerado um genótipo de interesse em programas de melhoramento do gênero, e muito utilizado como porta-enxerto responsivo para a espécie P. edulis (STENZAL & CARVALHO, 1992). A cultura de tecidos é uma importante ferramenta biotecnológica e promissora para estudos correlacionados ao gênero Passiflora. Os trabalhos de cultura de tecidos envolvendo P. cincinnata estão restritos à fusão de protoplastos (VIERIA E DORNELLAS, 1996), organogênese (LOMBARDI, 2003), cultura de embriões zigóticos (GUZZO, 2004). Apesar de conter mais de 600 espécies de Passiflora, relatos sobre a obtenção de embriogênese somática ainda são restritos (SILVA, 2009). O presente trabalho teve como objetivo a indução da embriogênese somática a partir de embriões zigóticos de P. cincinnata.

METODOLOGIA:

Sementes de P. cincinnata foram colocadas para fermentar em recipiente plástico, à temperatura ambiente, por 5 dias para a retirada da mucilagem. Após secagem a temperatura ambiente, o tegumento foi removido com auxílio de uma mini-morsa. A desinfestação foi realizada mediante a imersão das sementes em etanol 70 % (v/v) por 1’, seguida da imersão em hipoclorito de sódio a 2,5% (v/v) com 2 gotas de Tween-20 por 20’, e submetidas a 4 enxágües consecutivos em água destilada e autoclavada. Os embriões zigóticos foram extraídos assepticamente e inoculados em meio suplementado com sais básicos de MS (MURASHIGE & SKOOG, 1962), vitaminas B5 (GAMBORG et al.,1968), 0,01% (p/v) de mio-inositol e 0,3% (p/v) de sacarose, e 0,28% (p/v) de ágar como agente gelificante. Foram utilizadas diferentes concentrações de 2,4-D (4,6; 9,1; 13,6; 18,1; 22,6; e 27,1 μM) e BAP a 4,5 μM e 2,4-D e BAP isoladamente (2,3 μM, 4,5 μM), respectivamente. O pH foi ajustado para 5,7 ± 0,1 e autoclavado por 20 minutos (121 ºC e 1,1 atm de pressão). Foram adicionados 20 mL de meio em placas de Petri e vedadas com filme de PVC, cultivadas em BOD a uma temperatura 27 ± 2 ºC por 30 dias. Foi utilizado o delineamento experimental inteiramente casualizado com 4 repetições por tratamento e 10 embriões zigóticos por placa.

RESULTADOS:

Após 30 dias de cultivo, os tratamentos na ausência de reguladores de crescimento e com 2,4-D e BAP isoladamente apresentaram um alongamento do ápice do embrião e inicio da formação de raízes. Já os embriões inoculados em meio de cultura, suplementado com diferentes combinações de 2,4-D e BAP apresentaram inicialmente a formação de calos embriogênicos de coloração amarelada e aspecto friável. SILVA et al. (2009) relatam que após 30 dias de cultivo embriões zigóticos calejaram efetivamente, principalmente na região dos cotilédones, resultado da interação positiva entre as combinações dos reguladores de crescimento. Após 60 dias de cultivo, todos os tratamentos com 2,4-D combinados com BAP produziram embriões somáticos. Altas concentrações de 2,4-D influenciaram na freqüência de calos com embriões somáticos em todos os estágios de desenvolvimento. A concentração de 18,1 μM de 2,4-D combinado com BAP produziu maior número de embriões somáticos e a posterior conversão em plântulas. Os resultados obtidos possibilitam a otimização de protocolo para a obtenção de plantas de P. cincinnata e o conhecimento desta via morfogênica, poderá ser empregada para a indução de embriogênese somática em Passiflora edulis, bem como, a utilização como fonte de explante para a transformação genética.

CONCLUSÃO:

A utilização de embriões zigóticos como fonte de explante de P.cincinnata foi eficiente na indução da embriogênese somática, quando utilizado diferentes concentrações de 2,4-D e BAP ocorrendo interação positiva entre a auxina e a citocinina, respectivamente. - A concentração 18,1 μM de 2,4 -D combinado com 4,5 μM BAP produziu maior número de embriões somáticos. - O estabelecimento de protocolo otimizado para a produção de embriões somáticos em Passiflora cincinnata, favorece a propagação massal da espécie, com a possibilidade de ser utilizado para a indução de embriogênese somática na espécie Passiflora edulis, sendo esta a mais utilizada comercialmente.

Palavras-chave: Passiflora, Morfogênese in vitro, Embriogênese somática.