63ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 3. Enzimologia

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE DE LIPASE SECRETADA POR ISOLADOS DE Trichoderma spp. EM PRESENÇA DE PAREDE CELULAR DE Fusarium solani, Fusarium oxysporum E Rhizoctonia solani.

João Paulo Cabral de Brito 1 Fabyano Alvares Cardoso Lopes 1 Cirano José Ulhoa 2

1. Laboratório de Enzimologia - ICB II/UFG - Campus Samambaia, Goiânia, GO. Cx. Postal 131, CEP-74001-970. 2. Dr./ Orientador - Laboratório de Enzimologia - ICB II/UFG - Campus Samambaia, Goiânia, GO. Cx. Postal 131, CEP-74001-970.

INTRODUÇÃO:

Os fungos do gênero Trichoderma são conhecidos por sua habilidade de funcionar como um agente de controle biológico (ACBs), principalmente no controle de fitopatógenos. Sabe-se que linhagens de Trichoderma produzem diversos antifúngicos, antibióticos, atuam como competidores de fungos patógenos, promovem crescimento e induzem resistência em plantas, além de realizar o processo de micoparasitismo, onde há a libereção de diversas enzimas hidrolíticas que degradam a parede celular do fungo hospedeiro, das quais se pode destacar as lipases. As lipases capturam o grupo acil do glicerídeo formando um complexo acil-lipase, e então transfere para um grupo hidroxila da água. Em condições não-aquosas, a lipase pode transferir o grupo acil do ácido carboxílico para outro nucleófilo além da água. Sua atuação na síntese e na degradação de moléculas orgânicas é de grande relevância, e por isso hoje são utilizadas na aplicação para a indústria alimentícia, cosmética, têxtil e farmacêutica. O objetivo desse trabalho foi avaliar a atividade de lipase secretada por isolados de Trichoderma spp. em presença de parede celular dos fitopatógenos Fusarium solani, Fusarium oxysporum e Rhizoctonia solani.

METODOLOGIA:

Foram utilizados vinte e quatro isolados de Trichoderma spp. (EMBRAPA-CNPAF) e os fitopatógenos F. solani, F. oxysporum e R. solani (EMBRAPA-CNPAF). Para a produção de enzimas hidrolíticas, discos de 3 mm de diâmetro originados das placas dos isolados de Trichoderma spp. foram colocados em Erlenmeyer de 250 mL contendo 10 mL de meio TLE e parede celular dos fitopatógenos, liofilizada e macerada (0,5%) como fonte de carbono e nitrogênio. Os frascos foram incubados em agitador rotatório à 28ºC e velocidade de 120 rpm. Após 48 horas de incubação, o sobrenadante de cultura foi coletado, através de filtração à vácuo, e utilizado como fonte da enzima hidrolítica. A atividade da lipase foi determinada pela reação com pNP-palmitato (5mM, solubilizado em acetonitrila). A concentração de pNP liberada será determinada por espectofotometria a 405nm. Uma unidade de atividade enzimática (U) foi definida como a quantidade de enzima que libera 1umol de p-nitrofenol por minuto de reação.

RESULTADOS:

Em relação à atividade enzimática de lipases, os isolados que se destacaram foram o T. gamsii 11/09 (0,005848 U/ml), T. asperellum 362/02 (0,005269 U/ml), T. harzianum 480/02 (0,005946 U/ml), T. asperellum 468/02 (0,00463 U/ml) e T. asperellum 400/01 (0,005568 U/ml), sendo que este último também apresentou uma atividade relativamente alta de produção de lipase (0,008382 U/ml) em parede de R. solani, quando comparado aos outros isolados crescidos nesta mesma parede. Quanto à atividade específica, os isolados que se destacaram foram o T. asperellum 468/02 (0,70256 U/mg), T. gamsii 11/09 (0,331067 U/mg), T. harzianum 480/02 (0,362034 U/mg), T. asperellum 362/02 (0,178946 U/mg), e o isolado T. asperellum 400/01 (0,447688 U/mg), crescidos em parede de F. oxysporum sendo que este último isolado, também apresentou uma alta atividade específica (0,673933 U/mg) quando crescido em parede de R. solani. Baseando-se nesses dados, a parede de F. oxysporum parece ser capaz de induzir uma maior produção dessa enzima, provavelmente esse fungo deve possuir compostos lipídicos em maior quantidade em sua parede celular em relação à composição da parede celular dos outros fitopatógenos.

CONCLUSÃO:

Todos os isolados destacados possuem um grande potencial para a produção de lipase que poderá ser utilizada em várias áreas, desde a sua utilização em indústrias de alimentos até a sua utilização no controle biológico de fitopatógenos, visto que a parede celular possui lipídeos em sua composição, porém ainda são necessários estudos de produção e caracterização destas enzimas.

Palavras-chave: Trichoderma, Lipases, Fitopatógenos.