63ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 2. Microbiologia Aplicada

INFLUÊNCIA DE DIFERENTES FONTES DE NITROGÊNIO NO CRESCIMENTO E NA PRODUÇÃO DE LIPASES PELO FUNGO Fusarium oxysporum ATCC 48112 POR FERMENTAÇÃO SUBMERSA

Juelina Oliveira dos Santos 1 Laís Jéssica de Oliveira Veloso 1 Carla Verônica Rodarte de Moura 1 Joaquim Soares da Costa Júnior 3 Tânia Maria da Silva Lima 2 Analu de Vasconcelos Bernardo 1

1. Depto de Química, Centro de Ciências da Natureza, Universidade Federal do Piauí - UFPI 2. Profa. Dra./ Orientadora - Depto.de Química - UFPI 3. Instituto Federal do Piauí - IFPI

INTRODUÇÃO:

As lipases são enzimas pertencentes ao grupo das serinas hidrolases (EC 3.1.1.3), capazes de catalisar reações de hidrólise, transesterificação, esterificação e lactonização (esterificação intramolecular). As lipases provenientes de microrganismos constituem um grupo de valiosas enzimas de aplicação biotecnológica, devido principalmente à versatilidade de suas propriedades, no que se refere à atuação enzimática, especificidade ao substrato e facilidade de produção em grandes quantidades. Dentre os microrganismos lipolíticos, os fungos filamentosos são considerados bons produtores e suas lipases são as preferidas para aplicação industrial. A composição do meio e condições de fermentação geralmente têm papel central na produção de lipases extracelulares, bem como a identificação de uma formulação de meio que seja efetivo e a condição da cultura utilizada é de grande importância para o melhoramento dos processos de produção e de purificação, que ainda apresentam um custo elevado. Dessa forma este trabalho teve como objetivo dar continuidade ao estudo de obtenção de um meio de cultura para produção de lipase por Fusarium oxysporum ATCC 48112 utilizando diferentes fontes de nitrogênio, visando diminuir os custos de produção da enzima.

METODOLOGIA:

O fungo F. oxysporum ATCC 48112 foi cultivado em BDA a 30 °C por sete dias para a obtenção de esporos. A concentração de esporos foi determinada por contagem em câmara de Neubauer após diluição adequada (10-4) em uma solução contendo 0,75 mL de Triton X-100 (0,1% v v-1) e 0,25 mL da suspensão de esporos. A inoculação nos meios foi realizada adicionando-se a suspensão de esporos previamente diluída até a concentração de esporos (2x106 esporos mL-1) para cada 100 mL de meio de cultura. O meio de cultura utilizado na fermentação foi o meio mineral Czapeck Dox Modificado (CDM) suplementado com peptona bacteriológica ou extrato de levedura em substituição ao nitrato de sódio que faz parte da composição original do meio. Os experimentos foram realizados em duplicata, em erlenmeyers de 250 mL, hermeticamente fechados, com volume inicial do meio de 100 mL e mantidos em agitador orbital a 30°C por 120 horas, com agitação de 200 rpm. Amostras de 7,0 mL foram filtradas, a cada 24 horas, e o sobrenadante utilizado para dosagem de atividade lipásica e proteásica. A fração sólida retida no filtro foi usada para avaliar o crescimento celular por peso seco.

RESULTADOS:

Comparativamente ao meio fermentativo que continha o nitrato de sódio, o meio que continha peptona ou extrato de levedura como fonte de nitrogênio, apresentou um crescimento celular final semelhante, porém com a produção de lipases quatro vezes superior. Possivelmente, determinadas substâncias necessárias à síntese proteica (cofatores, ácidos aminados) estão em concentrações insuficientes ou mesmo ausentes no controle, em relação ao meio que continha a peptona ou extrato de levedura. Estas substâncias se mostraram substituintes adequados para o nitrato de sódio. A atividade lipásica máxima foi semelhante para as fontes e concentrações (0,2 ou 0,4 %, p v-1) de nitrogênio testadas, apresentando o crescimento celular final um comportamento crescente em função do aumento da concentração inicial de nitrogênio.

CONCLUSÃO:

O fungo F. oxysporum ATCC 48112 mostrou-se ser bom produtor de lipase. A substituição da fonte de nitrogênio inorgânica (nitrato de sódio) pela orgânica (peptona ou extrato de levedura) favoreceu a produção de lipases pelo fungo, analisando os perfis de crescimento celular e de atividade enzimática. Observou-se ainda que, a atividade lipolítica máxima encontrada para as fontes de nitrogênio testadas foi também considerada bastante satisfatória.

Palavras-chave: Fusarium oxysporum, otimização, lipases extracelulares.