63ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 6. Farmacologia - 1. Farmacologia Bioquímica e Molecular

DIMINUIÇÃO DA ATIVIDADE DA Na+, K+-ATPase NAS CONVULSÕES INDUZIDAS POR PENTILENOTETRAZOL EM CAMUNDONGOS

Clarissa Vasconcelos de Oliveira ¹
Bárbara Picada Marquezan ¹
Vinícius Rafael Funck ¹
Letícia Pereira Meier ¹
Carlos Fernando de Mello ¹
Mauro Schneider Oliveira ²

1. Curso de Farmácia, Universidade Federal de Santa Maria.
2. Programa de Pós-graduação em Farmacologia, Universidade Federal de Santa Maria.
3. Programa de Pós-graduação em Farmacologia, Universidade Federal de Santa Maria.
4. Curso de Farmácia, Universidade Federal de Santa Maria.
5. Programa de Pós-graduação em Farmacologia, Universidade Federal de Santa Maria.
6. Prof. Dr./Orientador - Campus Itaqui, Universidade Federal do Pampa.

INTRODUÇÃO:

No cérebro, a atividade da enzima Na⁺, K⁺-ATPase é essencial para a manutenção do gradiente eletroquímico, manutenção dos potenciais de repouso e liberação e captação de neurotransmissores. Assim, uma diminuição da atividade desta enzima ocasiona aumento ou diminuição da excitabilidade cerebral, dependendo do grau de inibição e da área cerebral afetada. Estudos recentes demonstram que mutações no gene que codifica a subunidade alfa da Na⁺, K⁺-ATPase causam o aparecimento de convulsões, e que a administração de ouabaína, um inibidor da Na⁺, K⁺-ATPase, causa o aparecimento de convulsões em camundongos. Dada essa associação entre Na⁺, K⁺-ATPase e convulsões, e o elevado número de pacientes com epilepsia e que apresentam convulsões refratárias as drogas disponíveis atualmente, o objetivo deste estudo foi determinar se existe relação entre a atividade da Na⁺, K⁺-ATPase e a indução e manutenção das convulsões induzidas por pentilenotetrazol (PTZ), um agente convulsivante clássico amplamente utilizado na descoberta de novos agentes anticonvulsivantes.

METODOLOGIA:

Camundongos Swiss machos adultos (3 meses de idade, 25-30 g) foram anestesiados com cetamina e xilazina, e eletrodos para registro eletroencefalográfico (EEG) foram posicionados sobre o córtex parietal para realização do EEG. Uma semana após o procedimento cirúrgico os animais foram injetados com PTZ (30, 45 ou 60 mg/kg; i.p) ou veículo (NaCl 0,9 %; i.p.) e observados por 15 minutos quanto a latência para convulsões clônicas e generalizadas tônico-clônicas e o escore de gravidade das convulsões. Após análise comportamental das convulsões os animais foram sacrificados e o córtex e hipocampo rapidamente removidos e homogeneizados em tampão Tris-HCl (10 mM, pH 7.4) para determinação da atividade da Na⁺, K⁺-ATPase por um método colorimétrico baseado na taxa de hidrólise do ATP na presença e ausência de ouabaína. Além disso, a expressão da subunidade alfa foi determinada por western blot. A análise estatística utilizada foi o teste de Kruskal-Wallis seguida do teste de Dunn (latência para convulsões), ANOVA de uma via seguida do teste de Bonferroni (escore das convulsões), teste t de Student não-pareado (expressão da subunidade alfa) e cálculo do coeficiente de correlação de Pearson (análises de correlação).

RESULTADOS:

A análise estatística revelou que a administração de PTZ causou convulsões de maneira dose-dependente e que a administração da maior dose de PTZ (60 mg/kg) causou uma diminuição de 37,63 % da atividade da Na⁺, K⁺-ATPase no córtex [F(3,39)= 2,910; P<0,05] mas não no hipocampo [F(3,39)= 0,593; P>0,05] dos camundongos. O cálculo do coeficiente de correlação de Pearson revelou a existência de correlação positiva entre a atividade da Na⁺, K⁺-ATPase no córtex e a latência para convulsões clônicas (r²=0,55; P<0,05) e generalizadas tônico-clônicas (r²=0,61; P<0,05) na dose de 60 mg/kg de PTZ. Além disso, foi encontrada uma correlação negativa entre a atividade da Na⁺, K⁺-ATPase no córtex e o escore de gravidade das convulsões na dose de 60 mg/kg de PTZ (r²=0,51; P<0,05). Coletivamente, esses dados indicam que existe uma estreita relação entre a diminuição da atividade da Na⁺, K⁺-ATPase e o aparecimento e gravidade das convulsões induzidas por PTZ na dose de 60 mg/kg. A expressão da subunidade alfa Na⁺, K⁺-ATPase não foi alterada pelas convulsões induzidas por PTZ [t(17)=0,0098; P>0,05], sugerindo que a diminuição da atividade da Na⁺, K⁺-ATPase no córtex de camundongos após a administração de PTZ (60 mg/kg) não é devida a uma alteração na expressão da subunidade alfa da enzima.

CONCLUSÃO:

Concluímos que existe uma estreita relação entre a diminuição da atividade da Na⁺, K⁺-ATPase no córtex cerebral de camundongos e o aparecimento e gravidade das convulsões induzidas por PTZ, e que essa diminuição da atividade da Na⁺, K⁺-ATPase não é devida a uma alteração na expressão da subunidade alfa da enzima. Dada a importância do modelo de convulsões por PTZ para o desenvolvimento de drogas anticonvulsivantes e os resultados do presente estudo, é possível que a Na⁺, K⁺-ATPase seja um alvo para o desenvolvimento de novos anticonvulsivantes.

Palavras-chave: Convulsão, Na+, K+-ATPase, Pentilenotetrazol.