63ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 6. Genética

DETERMINAÇÃO DE GENOTOXICIDADE DO PERÓXIDO DE HIDROGÊNIO NA OTIMIZAÇÃO DE CONTROLE POSITIVO PARA ENSAIO COMETA

Lauana Souza Diniz 1 Juliana Borges de Abreu 1 Juliana Ferreira da Silva 1 Damiana Miriam da Cruz e Cunha 1 Aparecido Divino da Cruz 1 Claudio Carlos da Silva 2

1. Núcleo de Pesquisas Replicon - NPR 2. Dr./Orientador - Núcleo de Pesquisas Replicon -NPR

INTRODUÇÃO:

O uso de certas substâncias como promotor de dano genômico para parâmetro de comparação em testes mutagênicos é uma prática muito usada. Dentre essas substâncias podemos citar a Mitomicina C (MMC) e o Peróxido de Hidrogênio (H2O2). A Mitomicina C é amplamente usada no tratamento de neoplasias malignas, atua inibindo seletivamente a síntese de ácido desoxirribonucléico (DNA), já tendo sido amplamente estudadas as doses de melhor ação, porém possui um alto custo e baixa validade. O Peróxido de Hidrogênio é um agente oxidante que em baixas concentrações é utilizado como esterilizante e em altas concentrações atua em mecanismos de degradação de ácidos nucléicos. Possui um baixo custo comercial e fácil armazenagem, tendo assim, maior vantagem sobre a Mitomicina C.

METODOLOGIA:

Para estabelecer uma comparação da porcentagem de dano genômico causado por cada uma dessas substâncias, determinando assim, qual seria melhor como parâmetro para controle positivo, foi realizado o ensaio cometa, seguindo o protocolo de Singh et al (1988), no qual foram avaliados, através do software Comet Score™, 50 núcleoides de cada concentração, para análise de tamanho de cauda e porcentagem de DNA na cauda, tendo como amostra sangue periférico humano que foi exposto em meio de cultura a 100 µL de quatro diferentes concentrações de Peróxido de Hidrogênio (H2O2: A- 100 µM ; B- 150 µM ; C- 200µM; D- 250µM) e à uma concentração de Mitomicina C (CP-100 µL á 2,5mg/mL), durante uma hora. Para a análise estatística foi realizado os testes ANOVA e Tukey.

RESULTADOS:

Teve-se que a porcentagem de DNA na cauda não foi significativa (p>0,05), já o tamanho da cauda foi significativo, sendo as concentrações B, C e D de Peróxido de Hidrogênio estatisticamente maiores do que o controle negativo e do que a concentração de Mitomicina C, sendo a concentração D com maior índice de danos, mostrando ser dose dependente.

CONCLUSÃO:

Assim, observamos que, analisando o padrão de dano genômico, o Peróxido de Hidrogênio tem eficiência para ser utilizado como controle positivo para Ensaio Cometa em concentrações acima de 250µM.

Palavras-chave: Mitomicina C, Grupo controle, Genotóxico.