63ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 3. Genética Humana e Médica

EXTRAÇÃO DE DNA DE AMOSTRAS CERVICAIS OBTIDAS DE MULHERES HIV-POSITIVAS PARA AVALIAÇÃO DA CARGA VIRAL DO HPV.

Gustavo Caires Neves Magalhães 1 Michelle Cristine Carlos Rodrigues 2 Vera Aparecida Saddi 3

1. Depto.de Biomedicina, Pontifícia Universidade Católica de Goiás – Puc Go. 2. Mestrado em Genética - Puc Go 3. Profa. Dra./Orientadora - Mestrado Genética – Puc Go.

INTRODUÇÃO:

O papilomavírus humano (HPV) é um vírus DNA transmitido sexualmente, sendo aceito como o agente etiológico central na gênese dos tumores cervicais, pois mais de 90% desse tipo de câncer apresenta o DNA do HPV integrado no genoma (Strickler et al., 2003). Dentre os possíveis co-fatores associados ao HPV na gênese do carcinoma escamoso do colo uterino estão: fatores imunológicos (resposta imune local e humoral, Síndrome da Imunodeficiência Adquirida Humana), fatores genéticos como o polimorfismo da proteína p53, tabagismo e o uso de contraceptivos orais. Todos esses fatores interagem em menor ou maior intensidade com as oncoproteínas e com outros elementos do HPV, potencializando a ação do vírus na célula hospedeira e facilitando o desenvolvimento dosprocessos de imortalização e carcinogênese (Pinto et al., 2002).

METODOLOGIA:

A Seleção das pacientes: um grupo de 60 mulheres soropositivas para HIV foi selecionado no Centro de Atendimento ao Doente com AIDS (CADA). Após serem informadas sobre o projeto e concordarem em participar, as pacientes assinaram um consentimento escrito. As mulheres que atenderam ao convite, preencherem os critérios de inclusão e assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido foram incluídas no estudo e submetidas à coleta de material cérvico-vaginal para exame citológico e avaliação de carga viral. Todas as mulheres participantes foram submetidas a exame clínico cuidadoso, com inspeção das genitais externas e região perianal. As coletas das pacientes soropositivas ocorreram no CADA. Com uma cervix brush, coletou-se material da ectocérvice, com um diâmetro 5 a 8 mm e o material da endocérvice (com seis movimentos rotatórios), para um segundo exame citopatológico realizado pelo método convencional. Este material foi colocado em uma solução tampão preservadora (Universal Colection Médium – Digene Corporation ou PreservCyt Solution – Roche) e encaminhado para a extração de DNA de HPV. As extrações de DNA das amostras coletadas foram feitas com a utilização do kit comercial Wizard (Promega), de acordo com o protocolo Puregene DNA Isolation – modificado.

RESULTADOS:

Em nosso estudo, coletamos e analisamos 60 amostras de pacientes HIV positivas. Destas, 42 (70%) amostras, foram positivas para o DNA de HPV. Os resultados confirmam que as pacientes infectadas pelo HIV são mais susceptíveis a infecção pelo HPV, já que a ineficiência do sistema imune em eliminar a infecção pelo HPV contribui para a persistência do vírus no organismo, conforme também demonstrado por Sun et al., 1995 e Luque et al., 1999. Encontramos algumas dificuldades no processo de extração como a quantidade limitada de células sendo que houve a necessidade de extrair novamente cerca de 15 amostras.

CONCLUSÃO:

Nosso estudo contribuiu para o entendimento da interação, já estabelecida em outros estudos, entre o Papiloma vírus Humano e o Vírus da Imunodeficiência Humana.

Palavras-chave: Extração de DNA, Co-fatores, GAPDH.