64ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 3. Microbiologia

LINFOPROLIFERAÇÃO INDUZIDA POR METABÓLITOS DE Lactobacillus lactis E Lactobacillus acidophillus

Rubens Ferracini Junior 1 Virna Aina Mankievich 1 Fernanda Ancona Tardelli 1 Aristeu Gomes da Costa 1

1. Laboratório II - Microbiologia - Departamento de Farmácia - Centro Universitário Barão de Mauá

INTRODUÇÃO:

Microrganismos pertencentes à microbiota humana normal, particularmente do trato gastrointestinal, são referidos como importantes agentes de proteção contra infecções, principalmente por competir com patógenos externos por nicho e nutrientes e também por produzirem substâncias que controlam a população de outros microrganismos da microbiota. Também interagir diretamente com a mucosa intestinal, estimulando peristaltismo e/ou a produção de substâncias com atividades regulatórias sobre funções secretórias. Recentemente entretanto, muitos destes microrganismos e particularmente o grupo das bactérias lácticas, como os gêneros Lactobacillus e Lactococcus, vem sendo apresentados não só como importantes reguladores da atividade gastrointestinal, e dos mecanismos de barreira natural contra infecções, mas também como estimuladores de atividades imunológicas. Desta feita, a presença destas bactérias favoreceria as atividades imunológicas inatas, como a fagocitose inespecífica, e poderia até melhorar as atividades imunológicas adquiridas, pela estimulação do compartimento linfocitário. Neste contexto, o presente trabalho avalia uma eventual capacidade de metabólitos de Lactobacillus lactis e Lactobacillus acidophilus, induzirem a proliferação de linfócitos murinos.

METODOLOGIA:

Cepas de L. lactis e L. acidophilus, da coleção do Laboratório II de Microbiologia do Centro Universitário Barão de Mauá, foram utilizadas. As bactérias foram cultivadas em caldo BHI, por 120 h/ 37ºC. Depois, foram filtradas em membranas Millipore de 0,45 µm de diâmetro de poro e os filtrados obtidos foram adicionados de citrato de amônio, para precipitação de proteínas. Os precipitados foram purificados por diálise em água deionizada, dessecados, pesados e ressuspensos em concentrações de 125, 250, 500 e 1000 µg/m, utilizadas nos ensaios biológicos. Camundongos suíços machos, 10 animais com 30 dias e 30 gramas, foram eutanasiados em câmara de CO2, e após sangria, as células mononucleadas eram isoladas do sangue por gradiente de densidade, em Ficoll-Hypaque. Após lavagem, as células foram colocadas em meio de cultura RPMI 1640. As culturas realizadas com 2x106 células mononucleadas/ml, em triplicatas, em placas de 96 orifícios com fundo chato. Dez grupos foram montados: o primeiro não recebeu nenhum tratamento; o segundo foi tratado com concanavalina A; do terceiro ao sexto, tratados com metabólitos de L. lactis; e do sétimo ao décimo, tratados com metabólitos de L.acidophillus. As células foram então cultivadas por 24, 48, 72 e 96 horas, e timidina tritiada adicionada às culturas. Após cada período de incubação, as células eram aspiradas, depositadas em membranas, secas em estufa, e então a rediação determinanada contador de cintilação beta.

RESULTADOS:

Os metabólitos de Lactobacillus lactis e Lactobacillus acidophilus, foram capazes de estimular a proliferação linfocitária, de forma dose e tempo dependente. Os melhores resultados obtidos foram com os tratamentos com metábólitos de Lactobacillus lactis, que alcançou praticamente os mesmos níveis de proliferação resultantes do uso do mitógeno controle, a concanavalina A. Este composto controle é um dos mais frequentes controles de estudo em modelos estáticos de proliferação, onde as células mononucleares são obtidas de animais não previamente estimulados. Apesar disso, os índices de proliferação alcançados pelo tratamento com Lactobacillus acidophillus, foram muito interessantes nos dois últimos tempos de avaliação e para as concentrações intermediárias. Em fases precoces deste estudo já se havia observado a capacidade de metabólitos de L. lactis e L. acidophillus em melhorar o potencial fagocítico de macrófagos murinos estimulados “in vivo”, e ambas os extratos foram fortes indutores de migração celular e ativação inespecífica de células migrantes.

CONCLUSÃO:

Os resultados obtidos sugerem que metabólitos de Lactobacillus lactis e Lactobacillus acidophilus, apresentem capacidade estimulatória proliferativa direta sobre linfócitos murinos. Os eventos avaliados neste trabalho, e os resultados então obtidos, quando associados aos de outros projetos em que foram avaliados parâmetros como migração celular, ativação celular, potencial fagocítico, morfogênese vários leucócitos, indicam fortemente um papel modulador da atividade imune desempenhado pelos produtos metabólicos de bactérias do gênero Lactobacillus, principalmente L. lactis e L. acidophillus. O extrato proteíco obtido das culturas destas bactérias, tal como aqui obtido, está em processo de análises físico-químicas, passo importante para o entendimento de qual ou quais componentes ali presentes possam ser purificados, para avaliação em nova rodada de ensaios.

Palavras-chave: Lactobacillus, microbiota humana normal, linfoproliferação.