64ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 5. Genética Vegetal

COMPARAÇÃO DE CINCO PROTOCOLOS DE EXTRAÇÃO DE DNA, BASEADOS NO MÉTODO DE CTAB, EM Morinda citrifolia L.

Marcones Ferreira Costa 1 Ângela Celis de Almeida Lopes 1 Sérgio Emílio dos Santos Valente 2 Regina Lúcia Ferreira Gomes 3 João Paulo Gomes Viana 4 Sulimary Oliveira Gomes 5

1. Departamento de Ciências Biológicas- UFPI 2. Prof. Dr./ Orientador - Departamento de Ciências Biológicas- UFPI 3. Departamento de Fitotecnia- UFPI 4. Mestrando do Programa de Pós-Graduação em Genética e Melhoramento – UFPI 5. Mestranda do Programa de Pós-Graduação em Agronomia – UFPI

INTRODUÇÃO:

Morinda citrifolia L também conhecida como noni, é um arbusto encontrado em algumas regiões tropicais do mundo. Sua introdução no Brasil ocorreu em 1996, chegando ao Piauí, precisamente na Universidade Federal do Piauí em 2005. Pesquisas atuais indicam que diferentes partes dessa planta apresentam propriedades que trazem benefício à saúde humana; entre esses benefícios destaca-se a ação antioxidante, que auxilia o corpo a se livrar de radicais livres que causam dano às células. A realização de estudos de identificação e de caracterização molecular de plantas requer a utilização de métodos rápidos e precisos de extração de DNA. Este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a eficiência de diferentes protocolos de extração de DNA genômico em Morinda citrifolia L, identificando qual o método que resultava em um DNA de qualidade e em concentração adequada para ser utilizado em futuros estudos envolvendo técnicas de Biologia Molecular.

METODOLOGIA:

Folhas jovens foram coletadas no Núcleo de Plantas Aromáticas e Medicinais (NUPLAN) da Universidade Federal do Piauí (UFPI). Para realização dos experimentos, selecionaram-se tecidos foliares jovens, isentos de ectoparasitas. As extrações foram conduzidas no laboratório de Micologia do Departamento de Ciências Biológicas da Universidade Federal do Piauí. A quantificação foi realizada no laboratório de Biologia Molecular da EMBRAPA Meio Norte, na cidade de Teresina-Piauí. Foram avaliados cinco protocolos, todos utilizando CTAB como detergente: Clarke et al. (1989), Romano e Brasileiro (1998), Khanuja et al. (1999), Warude et al. (2003) e Khan et al. (2004). Para cada protocolo foram realizadas cinco extrações, partindo de 50 mg de tecido foliar fresco. Ao final de cada extração todas as amostras foram diluídas em 50 μL de tampão TE. Para os cinco protocolos de extração, os ácidos nucléicos obtidos foram quantificados e a pureza foi observada em espectrofotômetro (NanoDrop® 2000-2000c), utilizando-se 2 μL do DNA diluído em 50 μL de TE.

RESULTADOS:

Os resultados obtidos por espectrofotometria, usando o aparelho NanoDrop®, com relação à concentração e as relações A260/280 (concentração de DNA em relação as proteínas) e A260/230(concentração de DNA em relação a metabolitos secundários e componentes do tampão), do DNA extraído foram analisados e comparados. Observou-se que os métodos descritos por Romano e Brasileiro (1998) e por Warude et al. (2003) apresentaram altas concentração média de DNA, porém a qualidade do DNA resultante da aplicação dos métodos não foi satisfatória. O protocolo Khan et al. (2004), forneceu baixas concentrações de DNA e os valores das razões A260/280 e A260/230 estão fora dos limítrofes padrões que são de 1,8 a 2,2 para a primeira e de 2,0 a 2,2 para a segunda relação. O método de Clarke et al. (1989), obteve, os melhores resultados, em relação a média da concentração de DNA (603,0 ng/µl), apesar de ter apresentado grau de pureza inferior em comparação ao obtido pelo protocolo de Khanuja et al. (1999), o qual apresentou amostras com uma das maiores quantidade de DNA (concentração média de 3 76,6 ng/µl) e com as melhores relações de pureza em comparação aos demais protocolos testados ( 1,6 A260/230 e 0,71 A230/260).

CONCLUSÃO:

Entre os cinco protocolos testados, para a extração de DNA de tecido foliar de Morinda citrifolia L. A técnica descrita por Khanuja et al. (1999), apresentou os melhores resultados em relação as concentrações de DNA e graus de pureza, após quantificação no espectrofotômetro.

Palavras-chave: Extração, DNA, Morinda citrifolia L.