65ª Reunião Anual da SBPC

D. Ciências da Saúde - 2. Medicina - 8. Medicina

Alterações da expressão de genes da via glicolítica pela inibição de ARHGAP21 em células de adenocarcinoma de próstata

Marcos Marangoni Junior - Faculdade de Ciências Médicas - UNICAMP Mariana Lazarini - Dra. - Centro de hematologia e hemoterapia – Hemocentro UNICAMP Sara Terezinha Olalla Saad - Profa. Dra./Orientadora Centro de hematologia e hemoterapia – Hemocentro UNICAMP

INTRODUÇÃO:

A proteína ARHGAP21 é expressa em todos os tecidos humanos, mas está aumentada principalmente em tecidos diferenciados e carcinomas escamosos. Essa proteína apresenta um domínio RhoGAP, responsável pela regulação de proteínas RhoGTPases. Suas funções envolvem diversos processos relacionados à tumorigênese, como migração e diferenciação celular. Ela interage com FAK, PKC zeta, alfa-catenina e ARF-1, e participa de outras vias de sinalização. A ARHGAP21 inibe a secreção de insulina glicose-dependente, e sua interação com FAK e PKC zeta é modulada pela própria glicose. Trabalhos recentes de nosso grupo demonstraram que a inibição da expressão de ARHGAP21 resulta em alterações na via glicolítica de células de câncer de próstata e também na modulação de genes relacionados à hipóxia e estresse oxidativo.

OBJETIVO DO TRABALHO:

Investigar a expressão de genes relacionados à glicólise e à hipóxia em linhagens celulares de adenocarcinoma de próstata controle, e submetidas à inibição de ARHGAP21.

MÉTODOS:

Ensaios de microarranjo foram realizados em células LNCaP, utilizando-se plataformas Human Gene (Affymetrix). Para validação, a expressão de alguns genes relacionados com hipóxia e glicólise foi avaliada por qRT-PCR nas mesmas linhagens por meio do software 7500 Applied Biosystem. Para isso, foram desenhados oligonucleotídeos iniciadores, os quais foram validados e tiveram sua eficiência verificada.

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

A inibição da ARHGAP21 modulou a expressão de doze genes relacionados com tais processos. O qRT-PCR confirmou a regulação positiva de HIG2, PGAM, BNIP3 e Staniocalcina em LNCaP siARHGAP21. Houve aumento da expressão de BNIP3 em PC3 siARHGAP, e a expressão de PLOD2 foi diminuída pela inibição da ARHGAP em células LNCaP e DU145. O HK2 sofreu regulação negativa em LNCaP e positiva em DU145 inibidas para ARHGAP21.

CONCLUSÕES:

Células tumorais usam principalmente a via glicolitica para obtenção de energia. Neste estudo conseguimos mostrar que o gene ARHGAP21 tem relação com alguns genes envolvidos com glicólise e sobrevivência celular à hipóxia em células de adenocarcinoma de próstata. Percebeu-se que ARHGAP21 pode estar relacionada à sobrevivência dos clones neoplásicos. Conseguimos, com isso, validar os resultados encontrados em ensaios de Micorarranjos de DNA em LNCaP si ARHGAP21, compatíveis com esse aumento na expressão de alguns desses genes. Apesar de termos observado diminuição da expressão de HIF1-α, esta proteína pode estar mais ativa nas células com inibição da ARHGAP21, o que poderá ser avaliado por imunofluorescência seguida de microscopia confocal, já que essa proteína migra para o núcleo em sua forma ativa.

Palavras-chave: Glicólise, Hipóxia, ARHGAP21.