65ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 2. Microbiologia Aplicada

Detecção da produção de substâncias semelhantes às bacteriocinas produzidas por Staphylococcus aureus e Staphylococcus aureus MRSA isoladas de diferentes enfermidades.

Dávida Maria Ribeiro Cardoso dos Santos - Setor de Microbiologia Geral e Clínica - UFAL Gustavo Vasconcelos Bastos Paulino - Setor de Microbiologia Geral e Clínica - UFAL Vívian da Silva Santos Lucena - Setor de Microbiologia Geral e Clínica - UFAL Rafaella Rodrigues Santos das Neves - Setor de Microbiologia Geral e Clínica - UFAL Zenaldo Porfirio da Silva - Prof. Dr. Setor de Microbiologia Geral e Clínica Regianne Umeko Kamiya - Profa. Dra./ Orientadora Setor de Microbiologia Geral e Clínica - UFAL

INTRODUÇÃO:

Os microrganismos multirresistentes estão cada vez mais frequentes, e Staphylococcus aureus MRSA e Staphylococcus Coagulase Negativo MRS (SCoN) estão entre os principais patógenos associados às infecções hospitalares graves. Além da multirresistência aos antibióticos, outros fatores de virulência podem contribuir para a patogenicidade de Staphylococcus spp., entre eles a produção de bacteriocinas e formação de biofilmes.

OBJETIVO DO TRABALHO:

Identificar 73 cepas de Staphylococcus spp.. isoladas de amostras clínicas de diferentes enfermidades nosocomiais, determinar o perfil de resistência das cepas de Staphylococcus spp. à Meticilina/Oxacilina, Teicoplanina, Linezulide e Vancomicina, determinar o espectro inibitório de substâncias semelhantes às bacteriocinas e analisar capacidade de produção de biofilme in vitro.

MÉTODOS:

As cepas foram isoladas em meio Agar manitol salgado e foram identificadas por testes de coloração de Gram, testes bioquímicos. As cepas foram congeladas em BHI glicerol e Skim Milk a 10% a -20° C. O perfil de resistência à Meticilina/Oxacilina, Teicoplanina e Linezulide foi testada de acordo com o método de Kirby-Bauer, como descrito pelo CLSI, 2010. Cepas com sensibilidade reduzida à vancomicina foram identificadas pelo teste de rastreamento VISA, resumidamente, os isolados foram reativados em BHA, e 10µl do inóculo padronizado (escala 0,5 Mc Farland), foram inoculadas em placas de BHA contendo 6µg/mL de vancomicina. As placas foram encubadas por 24hs à 37° C, as cepas foram consideradas intermediariamente sensível à vancomicina (VISA), quando apresentaram crescimento de colônias visíveis em BHA com vancomicina (CLSI, 2010). Para determinar atividade inibitória das substâncias semelhantes às bacteriocinas, foi utilizado o método de antagonismo, com algumas modificações, os testes foram realizados em duplicata e as cepas foram consideradas produtoras de bacteriocinas quando produziram halo (maior ou igual) a 6 mm. Para detectar a produção de biofilme os isolados foram reativados em BHI e os inóculos foram inseridos em BHI sacarose 0,5% em microplacas, por 48hs a 37º C, em aerofilia. Após esse período, as placas foram lavadas e coradas com cristal violeta 1% e descoradas com etanol a 99%. Realizou-se a leitura de absorbância no leitor de Elisa a 630 nm.

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

Foram coletadas 73 amostras no Centro de Patologia e Medicina Laboratorial (CPML), 100% das amostras foram positivas para o teste de catalase, através do teste de coagulase 80% foram classificadas como S. aureus e 20% como Coagulase Negativo (SCoN). O perfil de sensibilidade aos antimicrobianos mostrou que 38% (22/58) dos S. aureus são MRSA, dentre os SCoN 80% (12/15) são MRS, nenhum isolado apresentou resistência à Teicoplanina ou Linezulide. Nos testes de rastreamento, 50% (30/60) apresentaram perfil de sensibilidade reduzida à vancomicina e 27% (8/30) das amostras apresentaram crescimento elevado de colônias em meio contendo o antibiótico. Cerca de 10% (6/60) das cepas apresentaram produção de bacteriocinas, e somente uma cepa apresentou produção de bacteriocina com amplo aspecto, contra espécies bacterianas de interesse médico. Para verificar a formação de biofilmes as cepas foram classificadas de acordo com a densidade em: ≤ 0,120 não formadoras de biofilme, 0,120 a 0,240 pouco formadoras e ≥ 0, 240 boas formadoras. Cerca de 60% (35/57) dos isolados foram não formaram biofilme in vitro, 35% (20/57) formaram pouco biofilme e somente 1 cepa foi classificada como ótima formadora de biofilme.

CONCLUSÕES:

Dentre as cepas que formaram biofilme in vitro 66% (14/21) apresentaram resistência à meticilina e 71% (15/21) foram classificadas como VISA. Devido ao alto índice de isolados com resistência a meticilina principalmente entre os SCoN, o uso dos glicopeptídeos é mais intenso, podendo selecionar cepas com sensibilidade reduzida à vancomicina. A resistência aos antibióticos quando associada à produção de bacteriocina e principalmente à formação de biofilme pode aumentar ainda mais o tempo de internação do paciente, dificultar a terapêutica e elevar os níveis de morbidade e mortalidade.

Palavras-chave: Microrganismo, Biofilme, Resistência.