65ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 4. Genética Molecular

COMPARAÇÃO DE TÉCNICAS UTILIZADAS PARA A REALIZAÇÃO DE DIAGNOSTICO DA DOENÇA DE HUNTINGTON

Thays Andrade APOLINÁRIO - Curso de Biomedicina FACULDADE DE MINAS- FAMINAS Leonardo Luiz. de FREITAS - Curso de Biomedicina FACULDADE DE MINAS- FAMINAS Kátia Aparecida Monteiro Simas Campos - Curso de Biomedicina FACULDADE DE MINAS- FAMINAS Iane SANTOS - UNIRIO- UNIVERSIDADE DO RIO DE JANEIRO Luciana de Andrade AGOSTINHO - FACULDADE DE MINAS- FAMINAS

INTRODUÇÃO:

A doença de Huntington (DH) é uma desordem neurodegenerativa, autossômica dominante. A DH apresenta uma prevalência de 5-10 /100.000 indivíduos na Europa Ocidental. A mutação é causada por uma expansão de trinucleotídeos CAG no gene responsável por codificar a huntintina, o HTT (4p16.3). A proteína mutante tem curiosa afinidade por áreas cerebrais como os núcleos da base e cerebelo. A doença é de idade adulta e progride ao longo da vida, com sobrevida de 15 a 20 anos. Os alelos considerados normais possuem menos de 27 cópias CAG, os intermediários têm de 27 a 35 repetições CAG e os alelos com 36 a 39 unidades são denominados expandidos com penetrância reduzida. Os alelos com mais de 39 cópias CAG são os de penetrância completa. Um dos métodos para diagnóstico definitivo da DH é o teste molecular.

OBJETIVO DO TRABALHO:

O objetivo deste estudo foi comparar a eficácia das técnicas de eletroforese capilar automática e de eletroforese em gel de agarose para a determinação do tamanho dos alelos CAG em pacientes com DH.

MÉTODOS:

O DNA foi extraído do sangue periférico dos pacientes, a técnica de QF-PCR (Quantitative fluorescent polymerase chain reaction) foi realizada para amplificar uma região do exon1 do gene HTT. Para a determinação do tamanho das expansões CAG foram comparados os resultados de duas ferramentas de biologia molecular, a eletroforese em gel de agarose (2-3%) e a eletroforese capilar.

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

Os resultados da técnica de eletroforese capilar determinaram com melhor acurácia o tamanho das expansões CAG quando comparados aos resultados da técnica de eletroforese em gel de agarose. A determinação do tamanho destes alelos em gel de agarose teve uma variação de 20-30pb (pares de base) quando comparados ao tamanho real do alelo. Na técnica de eletroforese capilar esta variação foi de apenas 1pb quando comparado aos resultados das mesmas amostras processadas em outros laboratórios. Uma vez que, uma unidade de trinucleotídeo CAG a mais (+1 CAG) ou uma unidade a menos (-1 CAG) fazem com que um indivíduo seja classificado como portador ou não da DH, é importante que esta determinação do alelo CAG seja eficiente e exata, o que não ocorre na técnica de gel de agarose. É de extrema importância a precisão e reprodutibilidade da avaliação da expansão dos trinucleótideos CAG. Porém, ainda existem estudos que utilizam a eletroforese em gel de agarose para determinar as expansões. Alguns autores acham vantajosa a técnica de eletroforese em gel por ser rápida e econômica.

CONCLUSÕES:

Portanto, o método mais eficaz neste estudo para a realização do diagnóstico de DH foi a eletroforese capilar, pois o erro na determinação do número de CAG é menor. É de extrema importância determinar o número exato de expansões CAG do paciente para que seja realizado um aconselhamento genético adequado, assim como a terapia paliativa.

Palavras-chave: HTT, ELETROFORESE, CAG.