65ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 1. Biologia Molecular

DESENVOLVIMENTO DA METODOLOGIA PARA EXTRAÇÃO PROTÉICA EM TECIDO GENGIVAL DE RATO

Rayane Siqueira de Sousa - Universidade Estadual Vale do Acaraú - UVA Kátia Alves Ribeiro - Mestranda em Biotecnologia da Universidade Federal do Ceará (UFC) Annyta Fernandes Frota - Mestranda em Biotecnologia da Universidade Federal do Ceará (UFC) Dalyne Menezes Teles - Universidade Estadual Vale do Acaraú - UVA Antonio Mateus Gomes Pereira - Universidade Estadual Vale do Acaraú - UVA Ricardo Basto Souza - M. Sc./Orientador - Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular - UFC

INTRODUÇÃO:

A periodontite é uma doença inflamatória crônica caracterizada por infiltração de leucócitos, perda de tecido conjuntivo, reabsorção de osso alveolar e formação de bolsa periodontal (PAGE et al, 1997; BARTOLD et al, 1996). Representa um grave problema de saúde pública, estando entre as afecções crônicas mais comuns em humanos, afeta 5 a 30% da população adulta de 25 a 75 anos de idade e é a principal causa de perda de dentes em adultos (AMERICAN ACADEMY OF PERIOTONTOLOGY, 1996, 1999). A patogênese consiste em uma seqüência de eventos imuno-inflamatórios ainda não elucidados (BROWN et al, 1993). O estudo da proteômica é um dos segmentos da Biologia Molecular que vem crescendo e tem contribuído para elucidar respostas relativas à interação de proteínas a certas doenças. O desenvolvimento de novas metodologias que permitam o estudo do perfil protéico em tecido gengival pode contribuir para a elucidação de vias metabólicas envolvidas na etiopatogenia das patologias periodontais.

OBJETIVO DO TRABALHO:

O objetivo deste estudo foi desenvolver uma nova metodologia apropriada para extração de proteínas de tecidos gengivais de ratos.

MÉTODOS:

O estudo foi realizado em julho de 2010, no laboratório de Genética Molecular do Núcleo de Biotecnologia de Sobral - NUBIS. Utilizaram-se tecidos gengivais de ratos, macerados em nitrogênio líquido. Protocolo 1: n=5; 1mL de Phosphate Buffered Saline (PBS) 20mM pH 7,2. Protocolo 2: n=5; 1mL de PBS e Sonicação com 50% de potência, em 10 ciclos de 20s, com intervalos 1min. Depois foram centrifugadas a 10.000 x g /10min/ 4°C, e sobrenadante transferido para outro tubo. Protocolo 3: n=5; 1mL de Tampão de Extração - Tris(hidroximetil)aminometano (TRIS) 25mM pH 7,4 , NaCl 20mM, 1% Tween 20 e precipitadas em acetona com 10% de Trichloroacetic Acid - TCA, após 3 lavagens de acetona, centrifugados 10.000 x g /10 min/ 4°C. O pellet foi secado por 1h e posteriormente ressuspendido em 1mL de PBS. As amostras foram analisadas por SDS-PAGE 12% (Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide gel Electrophoresis); parâmetros: 300V/ 30mA/ 2h. As imagens foram digitalizadas pelo ImageScanner III.

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

Pode-se constatar pela análise do gel de SDS-page 12% que os protocolos 1 e 2 obtiveram melhores resultados. Ambos conseguiram quantidades apropriadas de proteínas sem degradação para futuros estudos de expressão de proteínas em tecido gengival, atendendo as expectativas do trabalho.

CONCLUSÕES:

Os resultados obtidos neste trabalho contribuem para a determinação de uma metodologia de extração adequada para a obtenção de amostras de proteínas totais em estudos utilizando tecido gengival de rato.

Palavras-chave: Desenvolvimento de metodologia, Tecido gengival, Extração de proteínas.