65ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 3. Microbiologia

ANÁLISE DA FORMAÇÃO E DESENVOLVIMENTO DE BIOFILMES MISTOS ENTRE Candida albicans E Streptococcus mutans

Humberlânia de Sousa Duarte - Universidade Estadual Vale do Acaraú Victor Alves Carneiro - Prof. Dr./Orientador - Universidade Federal do Ceará Luiz Ferreira Aguiar Ponte - Prof. Dr./Orientador - Universidade Estadual Vale do Acaraú Marianne Mesquita Pontes - Universidade Estadual Vale do Acaraú Wanderléia de Aguiar Policarpo - Universidade Estadual Vale do Acaraú

INTRODUÇÃO:

Micro-organismos são encontrados unidos a diversos tipos de superfície, em agregados estruturados envolvidos em uma matriz de material exopolimérico, constituído basicamente de polissacarídeos, estrutura denominada biofilme. São constituídos geralmente por uma associação de diversos micro-organismos, inclusive entre bactérias e fungos. Essas estruturas complexas se relacionam frequentemente a doenças orais como a cárie, doenças periodontais e inflamação da mucosa. A adesão inicial dos micro-organismos a superfície e o processo de co-aderência aos organismos previamente fixados são fatores essenciais no processo de formação do biofilme. Onde, Candida albicans aderem-se a uma variedade de gêneros bacterianos e em particular exibem uma alta afinidade a uma escala de estreptococos orais. Biofilmes bacterianos têm sido amplamente explorados, enquanto poucos estudos têm relatado a associação entre fungos e bactérias. Portanto, mediante os pontos abordados, em que a formação de biofilmes de uma maneira geral pode ocasionar diversos impactos, com considerável relevância à saúde pública, faz-se necessário o desenvolvimento de estudos e pesquisas voltados ao assunto abordado, almejando uma melhor compreensão dos fatores e riscos impostos por essas complexas estruturas.

OBJETIVO DO TRABALHO:

O presente trabalho teve como objetivo avaliar a formação e desenvolvimento de biofilmes mistos entre Candida albicans ATCC90028 e Streptococcus mutans ATCC25175, analisando a interação entre ambas as espécies e observando se a associação desses micro-organismos exibe considerável alteração em relação ao crescimento do biofilme como um todo.

MÉTODOS:

Saliva estéril (0,5ml) a 25% foi incubada em placas de poliestireno de 24 poços por 16 h a 4°C e em seguida lavadas duas vezes com água destilada estéril. As células microbianas foram centrifugadas a 5000 g por 5 min a 4°C, ressuspendidas e ajustadas para uma concentração de 5 × 107UFC/ml (Unidade Formadora de Colônia) para a bactéria e 3 × 106UFC/ml para a levedura. Foram adicionados 0,5 ml da bactéria aos poços já contendo película adquirida. As placas foram incubadas a 37°C em shaking a 50 rpm, por 1 hora. Após 1 hora o meio foi trocado para possibilitar o desenvolvimento do biofilme em estufa durante 6 horas, a 5% de CO2, a 37ºC. Alcançadas as 6h, os poços foram lavados com meio SDB e adicionados 0,5 ml de suspensão de leveduras aos poços já contendo as bactérias. A placa foi submetida a agitação por mais 1h. Após, os poços foram lavados duas vezes com meio SDB e a placa foi novamente incubada em estufa por 6 horas para o desenvolvimento do biofilme multiespécie. Foi então realizada a quantificação indireta da formação de biofilme através da coloração com cristal violeta. A suspensão obtida foi transferida para uma placa de 96 poços estéril e em seguida foi medida a absorbância de cada poço com o auxílio do espectrofotômetro à 590nm.

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

Os testes realizados demonstraram a ocorrência de um aumento relevante na biomassa do biofilme multiespécie entre C. albicans e S. mutans, quando comparado ao crescimento dos biofilmes monoespécie da bactéria e da levedura. O aumento da biomassa formada no biofilme multiespécie possivelmente seja resultado de uma interação entre os micro-organismos envolvidos, visto que o mesmo apresentou-se maior quando em comparação com a biomassa formada nos biofilmes individuais. Alguns estudos relatam que a interação intermicrobiana com bactérias orais é crucial para a colonização e persistência de leveduras no interior de biofilmes microbianos complexos. Além disso, Segundo Jarosz e colaboradores (2009) foi demonstrado que bactérias da espécie S. mutans são capazes de aumentar significativamente o crescimento em massa de C. albicans por estimular a co-adesão, enquanto simultaneamente suprime a formação de hifas.

CONCLUSÕES:

Mediante a análise dos resultados obtidos foi possível concluir que a bactéria oral Streptococcus mutans ATCC25175 e a levedura Candida albicans ATCC90028 provavelmente interagem sinergicamente, de forma a estimular a formação e o desenvolvimento da estrutura do biofilme, visto que houve um considerável aumento na biomassa formada no biofilme multiespécie quando comparado às formas monoespécies.

Palavras-chave: Biofilme, Candida albicans, Streptococcus mutans.