65ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 3. Microbiologia

ENSAIO DE AGREGAÇÃO BACTERIANA INDUZIDA PELA LECTINA EXTRAÍDA DE Canavalia maritima (ConM)

Marianne Mesquita Pontes - Universidade Estadual Vale do Acaraú Victor Alves Carneiro - Prof. Dr./Orientador - Universidade Federal do Ceará Wanderléia de Aguiar Policarpo - Universidade Estadual Vale do Acaraú Humberlania de Sousa Duarte - Universidade Estadual Vale do Acaraú

INTRODUÇÃO:

Na superfície da cavidade oral existem muitas proteínas e glicoproteínas salivares que atuam como receptores para adesão de micro-organismos. Bactérias do gênero Streptococcus são amplamente encontradas na cavidade oral humana e possuem habilidade de aderir a superfícies orais, incluindo a película salivar, proporcionando um papel fundamental para o início da formação do biofilme dental, a partir da qual doenças como cárie, gengivite e periodontite podem surgir. Bioquimicamente, há uma interação específica entre os componentes da superfície bacteriana e da superfície de células hospedeiras, principalmente entre os receptores de lectinas e carboidratos. As lectinas são proteínas que possuem pelo menos um domínio não catalítico de ligação a mono ou oligossacarídeos específicos. E por este motivo, lectinas apresentam-se como uma potencial ferramenta biotecnológica para o estudo do controle de biofilmes, além de contribuir para o entendimento destes e permitir a possibilidade de identificação de novos recursos para a prevenção/controle de doenças. A literatura demonstra que a lectina ConM extraída de Canavalia maritima, que é uma leguminosa, apresenta atividade antimicrobiana com diversas cepa de Streptococcus (CALVALCANTE et al., 2011).

OBJETIVO DO TRABALHO:

Verificar a influencia/interação de lectinas na agregação de bactérias a película salivar, pelo o fato de reconhecerem carboidratos de forma específica, e se estas possuem a capacidade de inibir ou estimular o processo de agregação das bactérias, in vitro.

MÉTODOS:

As bactérias utilizadas neste ensaio foram: Streptotoccus sanguis, Streptococcus oralis. A lectina extraída de Canavalia maritima (ConM) foi testada com cada uma das bactérias dispostas em colunas e em triplicata. Em uma placa de microtitulação de 96 poços, foi adicionado 100 µl de saliva, previamente esterilizada, diluída em Tampão PBS com 0,5 mM de cloreto de cálcio pH 7,4 juntamente com 100µL da lectina ConM, numa concentração inicial de 166,6µg/ml até uma concentração final de 5,20µg/ml e incubada em estufa a 37°C com 10% de CO2 por uma hora. Após esse intervalo, 100 µl de suspensão bacteriana foi ajustada para uma D.O de aproximadamente 200nm e adicionada na placa pré-incubada. A placa foi novamente armazenada em estufa nas mesmas condições descritas anteriormente e o monitoramento foi realizado em intervalos de 1, 2, 3, 4, 12, 18, 24 e 30 horas no leitor de ELISA (Biotrak II Reader) em comprimento de onda de 620nm e em seguida foi calculado o coeficiente de agregação. Os resultados foram inseridos no Microsoft Excel (versão 2010 para Windows) e posteriormente analisados através do Teste One-way ANOVA com Bonferrone pós-teste, com o auxílio do programa GraphPad, Prism San Diego California USA (versão 5.0 para Windows).

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

De acordo com a metodologia empregada, os resultados obtidos demonstram que a lectina ConM se mostrou eficiente no processo de agregação bacteriana à película salivar. Foi possível observar também que a maior concentração para este efeito estimulatório foi a de 166,6 µg/ml, para a bactéria S. oralis testada com a lectina ConM. Pode-se observar também que as concentrações abaixo de 166,6ug/ml não implicaram significativamente na agregação da bactéria. As bactérias apresentam lectinas de superfície, e estas parecem funcionar nas etapas iniciais de adesão como quando ocorre a aderência das bactérias a células epiteliais da cavidade oral. Os carboidratos presentes, provavelmente desempenham um papel chave nesta agregação, sendo responsável pelo reconhecimento das bactérias.

CONCLUSÕES:

Portanto com base nos resultados obtidos foi possível concluir que a lectina ConM se mostrou eficiente no processo de agregação bacteriana à película salivar, in vitro. Desde modo, concluímos que a lectina possui receptores de natureza glicídica que interagem com os carboidratos presentes na superfície de bactérias do gênero Streptococcus. Esses dados contribuem para o entendimento da agregação das bactérias em um sistema de fluxo, como a cavidade oral.

Palavras-chave: Agregação, Estreptococos, lectina.