65ª Reunião Anual da SBPC

D. Ciências da Saúde - 5. Farmácia - 3. Bromatologia

NOVO MÉTODO PARA O APERFEIÇOAMENTO DE INOCULAÇÕES EM PLACAS RODAC

Cristiane Martins de Souza Sobrinho - Universidade Municipal de São Caetano do Sul – USCS-CII Sandra Emi Kitahara - Prof. Dr./Orientador – Universidade Municipal de São Caetano do Sul – USCS-CII Julio Cesar Bastos Fernandes - Prof. Dr./Corientador – Universidade Municipal de São Caetano do Sul – USCS-CII

INTRODUÇÃO:

Análises microbiológicas são importantes ferramentas para avaliar a qualidade de ambientes, alimentos, fármacos e em patologia clínica. Os principais métodos de inoculação da amostra em meios de cultura são a técnica de inoculação em profundidade (Pour Plate Method) e em superfície (Spread Plate Method). Na primeira, o inoculo é adicionado ao fundo da placa estéril, e em seguida o meio de cultura é vertido sobre a mesma. Movimentos rotacionais são empregados para favorecer a difusão da amostra e consequentemente a homogeneização. Na outra, o inoculo é adicionado sob o meio já solidificado na placa estéril. O inoculo é espalhando por toda a placa com auxílio de uma alça de Drigalsky. Estes métodos são muito eficientes na inoculação usando placas de Petri média e grandes, obtendo um crescimento uniforme das colônias por toda a placa. Contudo, quando usando placas Rodac (65X15 mm), a homogeneização da amostra deixa a desejar. A proposta deste trabalho é desenvolver uma metodologia simples para facilitar a homogeneização da amostra no meio de cultura de modo a obter um crescimento uniforme das colônias sobre placas Rodac.

OBJETIVO DO TRABALHO:

Neste trabalho foi desenvolvida uma nova metodologia para a inoculação de amostras em meios de cultura usando placas Rodac. O método visa melhorar a homogeneização da amostra no meio de cultura de modo a permitir um crescimento mais uniforme da colônia sobre toda a placa.

MÉTODOS:

Todos os reagentes usados foram de grau analítico ou farmacêutico. A água utilizada na preparação dos meios de cultura foi destilada previamente. O meio de cultura utilizado na inoculação das amostras foi o Ágar Padrão de Contagem (PCA), adquirido da Himedia e BD Difco TM, respectivamente. Água Peptonada (Himedia) foi usada para as diluições sucessivas da amostra na faixa de 10 -1 até 10 -6 gL-1. Amostras de caldo-de-cana adquiridas no comércio local foram utilizadas nos estudos do crescimento de fungos, leveduras e bolores. O meio de cultura foi preparado em tubos de ensaio com tampa rosqueável e esterilizados em autoclave a 1,05 atm e 121,8 o C. A amostra foi então inoculada no tubo e vertida sobre a placa Rodac. Fotografias digitais foram obtidas para analisar a uniformidade do crescimento microbiano sobre a placa.

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

A etapa de homogeneização é crítica nos métodos de inoculação, principalmente no de profundidade usando placas Rodac. Se não houver uma mistura adequada do meio com o inoculo os micro-organismos se proliferam de modo desuniforme na placa, se concentrando em grandes quantidades de colônias na periferia da mesma. Percebe-se que mesmo com o controle de temperatura entre 40-45 oC, é difícil a homogeneização do meio com o inoculo na placa pelo método Pour-plate. Em um curto período de tempo ocorre a gelificação do Agar na placa, gerando, o crescimento localizado das colônias. Para melhorar o processo de homogeneização e atenuar os problemas descritos anteriormente, se desenvolveu uma nova metodologia de inoculação, a qual se denominou de Técnica de Inoculação em Tubo (TIT). Neste procedimento os tubos com um volume exato da solução de PCA são esterilizados em autoclave e após a esterilização o inoculo é inserido diretamente no meio, cuja temperatura é monitorada para ser mantida a 45 oC. No tubo, a homogeneização é facilitada e após a mesma o meio de cultura inoculado é vertido na placa estéril sem mais necessidade de movimentos rotacionais, onde se corre o risco de perda da amostra inoculada. O resultado obtido é um crescimento uniforme das colônias por toda a placa Rodac com baixo índice de sobreposição de colônias.

CONCLUSÕES:

Com o método proposto de inoculação (TIT), o crescimento dos micro-organismos foi bem mais uniforme sob a placa Rodac, do que aquele obtido com o método Pour plate. As principais vantagens são rápida preparação do meio inoculado, a homogeneização facilitada e o procedimento simplificado que pode ser conduzido sem grandes dificuldades por operadores mesmo inexperientes em técnicas de inoculação microbiológica.

Palavras-chave: Inoculação;, Tubos;, Placas Rodac..