65ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 7. Fisiologia - 2. Fisiologia Comparada

Efeito dos inibidores enzimáticos aminotriazol e L-butionina sulfoximina sobre o sistema antioxidante de animais resistentes ao estresse oxidativo.

Leandro Pereira Bias Machado - Departamento de Farmácia - UnB Marcus Aurelio Costa Tavares Sabino - Departamento de Farmácia - UnB Alexis Fonseca Welker - Prof. Dr./Orientador - Departamento de Fisioterapia - UnB

INTRODUÇÃO:

Catalase e glutationa (GSH) são componentes relevantes na manutenção do balanço redox celular. Aproximadamente de 0,1-4% do oxigênio consumido na respiração celular não é completamente reduzido a H2O, levando à formação de espécies reativas de oxigênio (ERO’s). Estudos demonstraram que o estresse oxidativo causado pela superprodução de ERO’s estão envolvidos em diversas etiologias, como aquelas que causam eventos de privação de oxigênio, seguidos pela reoxigenação. Alguns animais apresentam resistência a episódios de anóxia-reoxigenação, mas os mecanismos chaves desta característica ainda não estão bem elucidados.

OBJETIVO DO TRABALHO:

Para investigar o papel da enzima catalase e do peptídeo GSH no sistema antioxidante de caramujos Helix aspersa, animais resistentes a ciclos de anóxia-reoxigenação, utilizamos os inibidores enzimáticos aminotriazol (ATZ), inibidor da catalase; e butionina sulfoximina (L-BSO) inibidor da síntese de GSH, para evidenciar os efeitos destes componentes sobre o balanço redox celular.

MÉTODOS:

Os animais foram divididos em três grupos: I- BSO+ATZ (n=10) – injetados com uma solução de BSO ([80 mg/ml], na dose de 12,5µL/g de animal) as 0h, e após 48h da primeira aplicação, injetados novamente com nova dose de BSO ([80 mg/ml], na dose de 12,5µL/g de animal) e ATZ( [200 mg/ml], na dose de 5µL/g de animal), e eutanasiados após 48 h (tempo de exposição de 96 h ao BSO e 48 h ao ATZ). II – SALINA (n=10) – Injetados duas vezes com solução salina (NaCl 0,9%), 0 h e 48h, nas mesmas condições do grupo I. III – CONTROLE (n=7): Animais sem nenhum tipo de injeção. O tecido muscular do pé foi armazenado a -80°c, e foram realizados experimentos posteriores para determinação da atividade da enzima catalase, níveis de ATZ e parâmetros de estresse oxidativo: danos oxidativos proteicos (proteínas carboniladas) e danos oxidativos em lipídeos (TBARS).

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

Os animais do grupo BSO+ATZ apresentaram em media uma concentração tecidual de 5% da dose aplicada (1g/kg de animal). Não houve alteração (p > 0,05) na atividade da enzima catalase na comparação entre grupos. Os parâmetros de danos oxidativos proteicos (proteínas carboniladas) e danos oxidativos em lipídeos (TBARS) também permaneceram inalterados (p > 0,05) em resposta a aplicação de BSO+ATZ. O mecanismo de inibição da catalase pelo ATZ está bem estabelecido, porém a atividade da catalase não diminuiu em resposta ao ATZ. Isto pode indicar que o tempo de exposição utilizado de 48h não foi capaz de promover uma inibição satisfatória, o que poderia ser explicado pela ação de fatores como a metabolização e excreção da droga devido ao longo tempo de exposição. Outros estudos encontraram 41% da dose inicial de ATZ no músculo do pé, com uma inibição da catalase de 60% em um período de exposição de 12h. O ATZ também é capaz de promover inibição 23,5 h após sua aplicação, provavelmente durante as 48h os animais atravessaram um período de baixa de atividade da catalase, o que não promoveu aumento nos parâmetros de estresse oxidativo proteico e em lipídeos.

CONCLUSÕES:

O conjunto de dados indica a existência de um eficaz mecanismo de proteção e outros fatores participando da manutenção do balanço redox nos animais H. aspersa. Assim a realização de novos experimentos, como a quantificação de H2O2 e a atividade de Glutationa Redutase (GR), são necessários para elucidar estes mecanismos.

Palavras-chave: Catalase, ATZ, Estresse oxidativo.