65ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 1. Biologia Molecular

CARACTERIZAÇÃO DAS PROTEÍNAS TOTAIS DE SEMENTES DE CAJUEIRO ANÃO (Anacardium occidentale var. nanum) FAGA 11 UTILIZANDO ELETROFORESE BIDIMENSIONAL

Flávia Muniz de Mesquita - Graduanda em Biologia - Universidade Estadual Vale do Acaraú - UVA Rodrigo Maranguape da Silva Cunha - Prof. Dr./Orientador - Depto. de Ciências Agrárias e Biólogicas - UVA Vitória Virgínia Magalhães Soares - Mestranda em Biotecnologia - Universidade Federal do Ceará - UFC João Garcia Alves Filho - Doutor em Bioquímica - Universidade Federal do Ceará - UFC Crislay Maria Pereira Fontenele - Graduanda em Biologia - Universidade Estadual Vale do Acaraú - UVA

INTRODUÇÃO:

A cajucultura é uma das atividades de maior importância socioeconômica na região Nordeste, onde possui maior disponibilidade de áreas potencialmente aptas para exploração. Devido à alta variabilidade genética, o cajueiro (Anacardium occidentale L.) é agrupado em dois tipos: comum e anão (Anacardium occidentale var. nanum), denominados em função do porte. O tipo anão caracteriza-se pelo porte baixo, e altura inferior a 4 m, também é identificado pela precocidade, iniciando o florescimento entre 6 e 18 meses. O Clone FAGA 11, em sequeiro é considerado um bom produtor de castanha, onde, o peso médio da castanha seca, da amêndoa e do pedúnculo são 10,6 g, 3,11 g e 63,9 g, respectivamente. A caracterização das proteínas presentes nas sementes de cajueiro é de extrema importância visto que, o entendimento de suas funcionalidades podem demonstrar avanços significativos na área de melhoramento genético, contribuindo para o desenvolvimento de diferentes variedades para determinados ambientes. A proteômica é um novo campo de estudo e tecnologia que se propõe analisar de forma global o conjunto de proteínas expressas no proteoma. Portanto pesquisas nessa área podem contribuir para análise e caracterização de proteínas importantes presentes no genótipo em estudo.

OBJETIVO DO TRABALHO:

O trabalho tem como objetivo extrair proteínas presentes na semente de cajueiro anão-precoce FAGA 11, para posterior análise utilizando eletroforese bidimensional (2D).

MÉTODOS:

As proteínas totais das sementes foram extraídas usando 20 mg de farinha da castanha acrescido de 40 mg de PVPP e 800 µL de tampão piridina-SDS. A mistura foi agitada por 2 h e 30 min a 4 ºC seguido de centrifugação a 10.000 x g por 40 min. Ao sobrenadante foi adicionado acetona gelada contendo 10% de TCA overnight a -20 ºC. Em seguida, a amostra foi centrifugada a 10.000 x g por 30 min e o sobrenadante descartado. O precipitado foi lavado com 1 mL de acetona 100% (3X) e seco a temperatura ambiente. As proteínas totais foram quantificadas pelo o método de Bradford (1976) e a integridade protéica foi analisada por SDS-PAGE. Para realização da eletroforese bidimensional as proteínas foram diluídas em solução de reidratação e posteriormente incubadas com tiras de pH imobilizado (pH de 3 a 10 e 13 cm). Após este processo foram focalizadas e equilibradas sendo submetidas à eletroforese com parâmetros determinados. Após a corrida, os géis foram colocados em solução de fixação, composta por etanol, ácido acético e água, durante 15 min, corados com solução de Comassie G-250 (Blue Silver). As imagens obtidas foram analisadas e editadas no programa Image Master 2D Platinum 6.0 e posteriormente identificados utilizando a ferramenta TagIdent do ExPASy (Expert Protein Analysis System).

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

Foram detectados 213 spots proteicos no gel bidimensional de semente cajueiro de FAGA 11. Dessas proteínas, a maior parte encontra-se distribuída em uma faixa de pH de 4 a 7 e no intervalo de massa de 20 a 45 kDa. Corroborando com nossos resultados, Brandão, Barbosa e Arruda (2010) em seus trabalhos com sementes de soja, obtiveram uma maior abundância de proteínas na faixa de pH de 4 a 7. Realizando uma identificação baseada em dados de ponto isoelétrico e massa molecular, foram identificadas algumas proteínas, sendo elas, proteínas de reserva pertencentes às classes, globulinas (Cruciferin 4), prolaminas (Alpha/beta-gliadin A-II, Prolamin PPROL 14P , Prolamin PPROL 14E) e albuminas (Albumin-8, 2S seed storage-like protein, 2S seed storage-like protein, Conglutin). As globulinas são proteínas solúveis em solução salina e são mais encontradas em sementes de dicotiledônea, as prolaminas são proteínas solúveis em álcool, como exemplo, pode ser citado a gliadina, que é considerada uma das maiores proteínas de reserva do trigo, as albuminas são proteínas solúveis em água, entre elas, existem as albuminas 2S, que em amendoim, possuem maior impacto alergênico do que as globulinas.

CONCLUSÕES:

As proteínas totais extraídas da semente de cajueiro anão precoce FAGA 11, apresentaram bandas proteicas íntegras na eletroforese unidimensional realizada na presença de SDS, demonstrando uma boa qualidade das proteínas obtidas, em relação à eletroforese bidimensional foram visualizados 213 spots expressos no gel. Através dos dados de pI e massa molecular gerados durante a análise de bioinformática, as proteínas foram pesquisadas em um banco de dados e classificadas em três grupos distintos, globulinas, prolaminas, e albuminas.

Palavras-chave: Proteínas, Cajueiro, Eletroforese Bidimensional.