65ª Reunião Anual da SBPC

D. Ciências da Saúde - 5. Farmácia - 1. Análise e Controle de Medicamentos

ESTUDO DE DEGRADAÇÃO FORÇADA POR HIDRÓLISE NOS PRINCÍPIOS ATIVOS ANTIRRETROVIRAIS ZIDOVUDINA E LAMIVUDINA PARA SELEÇÃO DE MÉTODO INDICATIVO PARA ESTUDO DE ESTABILIDADE (MIEE) UTILIZANDO CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA COM DETECTOR TIPO DIODO ARRAY DETECTOR (DAD)

Raíssa da Silva Lins - Graduanda Farmácia da Faculdade Pernambucana de Saúde e estagiária do LAFEPE Carolina Arruda Braz - Graduanda em Farmácia da UFRN e estagiária da COP&D-LAFEPE Maria Isabel de Oliveira Lima - Graduanda de Farmácia da UFRN e estagiária da COP&D-LAFEPE Ana Claudia Teixeira - Graduanda de Farmácia da UFSJ e estagiária da COP&D-LAFEPE Flávia Patrícia Morais de Medeiros - Profa Dra do Curso de Farmácia da FPS e Farmacêutica Industrial da COP&D-LAFEPE Bruno Aires dos Santos - Mestrando de Farmácia-UFPE e Farmacêutico Industrial da COP&D-LAFEPE/Orientador

INTRODUÇÃO:

Medicamento é definido como produto farmacêutico, tecnicamente obtido ou elaborado, com finalidade profilática, curativa, paliativa ou para fins de diagnóstico (BRASIL, 2010b) e constitui o recurso médico e terapêutico mais utilizado. Isto significa que deficiências na produção, circulação e consumo podem ter um grande impacto negativo na saúde da população. Assim, percebe-se a importância da indústria farmacêutica que deve funcionar como centro na saúde dos pacientes, investindo em pesquisas para garantir qualidade e segurança. O estudo de produtos de degradação faz-se necessário para atender aos requisitos de órgãos regulamentadores como a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), e guias internacionais, tais como o International Conference Harmonization (ICH) recomendado nos Estados Unidos, Japão e Comunidade Européia, que preconizam a quantificação do princípio ativo e seus produtos de degradação (ICH, 1993; FDA 1998). O Laboratório Farmacêutico do Estado de Pernambuco (LAFEPE) tem pesquisado e produzido medicamentos para tratamento da AIDS, dentre eles, cápsulas e comprimidos de zidovudina e lamivudina, respectivamente, que de acordo com as especificações da ANVISA, precisam garantir sua qualidade a partir da avaliação de produtos de degradação dos ativos.

OBJETIVO DO TRABALHO:

Desenvolver método indicativo de estabilidade para os princípios ativos zidovudina (AZT) e lamivudina (3TC) a partir da utilização de métodos de “stress testing” utilizando o cromatógrafo líquido de alta eficiência com detector DAD.

MÉTODOS:

Os ativos AZT e 3TC foram, respectivamente, pesados e diluídos a concentração final de 0,3mg/mL e 0,15mg/mL para determinação do estresse hidrolítico em triplicatas, isolados e associados. A 1ª diluição foi realizada em meio ácido (HCl 1,0 e 0,1M), em básico, (NaOH 0,1 e 1,0 M) e em neutro (água). Para quantificar a degradação, diluiu-se uma alíquota das soluções anteriores em solução diluente (19:1 de solução tampão de C2H7NO225mM, pH 4,0:CH3OH) e filtrou-as em membranas filtrantes 0,45µm. No desenvolvimento do MIEE, estas amostras isoladas e associadas foram injetadas em 02 equipamentos, ambos com as especificações: Hitachi Elite Lachrom-Merck® com bomba quaternária L-2130, auto-injetor L-2200, detector de arranjo de diodo (DAD) L-2045 e forno L-2300. Duas diferentes colunas cromatográficas com empacotamento C18 foram acopladas: Phenomenex®Luna e a LiChroCart®Purospher, com 250x4,00mm e 5µm de tamanho de partícula. O comprimento de onda foi 270nm, volume de injeção de 10µL e vazão da fase móvel de 0,5mL/min. A fase móvel tampão C2H7NO2:CH3OH:CH3CN em concentração gradiente, conforme consta na monografia da associação de zidovudina+lamivudina da USP 33. As soluções em hidrólises foram analisadas nos tempos: 0 (zero) e após a exposição de 24 e 72h, 07, 15 e 30 dias à 25ºC.

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

Os cromatogramas da coluna Phenomenex® Luna mostrou melhores resultados quando comparados aos da coluna LiChroCart® PurospherStar. Na avaliação dos resultados da degradação básica (NaOH 0,1M), para o 3TC isolado foi quantificado após 30 dias um decaimento de 33% no ativo e aparecimento de 2 picos (TRR 0,238 e 1,193), na associação, após 30 dias, o 3TC reduziu 24%. Em NaOH 1,0M, após 7 dias, o 3TC ativo, diminuiu 57% e observados 2 picos (TRR 0,238 e 1,398); na associação, o 3TC quantificou uma redução de 32% com a percepção de 3 picos. Após 30 dias, o 3TC em associação degradou 97%, sendo quantificado 5 picos (TRR 0,235; 0,293; 0,400; 0,534; 1,367). Não houve decaimento significativo no AZT ativo ou em associação após 30 dias para ambas as concentrações de NaOH. A degradação ácida (HCl 0,1M) no ativo 3TC apresentou decaimento do pico principal de 21% e aparecimento de 2 picos em 30 dias e para HCl 1,0 M, também após 30 dias, o ativo 3TC, diminuiu do pico principal 22% e confirmou dois picos que surgiram na condição 0,1M HCl. O ativo AZT não apresentou degradação quando exposto as condições ácidas. Os ativos apresentaram-se estáveis na hidrólise neutra, quando isolados e associados, os decaimentos foram de aproximadamente 2%. Foi realizada a análise espectral e pureza dos picos.

CONCLUSÕES:

Verificou-se que o método para substâncias relacionados da USP 33 modificado conseguiu detectar potenciais produtos de degradação, sendo possível calcular o decaimento dos picos de zidovudina (AZT) e lamivudina (3TC) quando expostos a soluções ácida, básica e neutra. Nas condições de hidrólises estudadas, constatou-se que o ativo de zidovudina (AZT) não demonstrou degradação de sua molécula, sendo considerado estável nestas condições. O contrário foi observado para o ativo de lamivudina (3TC) que apresentou degradação intensa nos estudos de estresse básico, principalmente quando exposto a solução de NaOH 1,0 M. Para atender os requisitos da legislação vigente, falta realizar os estudos frente a degradação oxidativa, térmica e fotodegradação, além de conduzir os estudos de validação do método indicativo para estudo de estabilidade (MIEE).

Palavras-chave: Ativos farmacêuticos, qualidade, indústria farmacêutica.