65ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 6. Bioquímica

AÇÃO INDUTORA DO ÓLEO DE CRÓTON NA INFLAMAÇÃO EM RATOS E EFEITO ANTI-INFLAMATÓRIO DOS POLISSACARÍDEOS DE Lobophora variegata NESTE PROCESSO

Thuane de Sousa Pinheiro - Depto.de Bioquímica – UFRN Marília da Silva Nascimento Santos - Depto.de Bioquímica – UFRN Luiza Sheyla Evenni Porfirio Will Castro - Depto.de Bioquímica – UFRN Joedyson Emmanuel de Macedo Magalhães - Depto.de Bioquímica – UFRN Celina Maria Pinto Guerra Dore - Depto.de Bioquímica – UFRN Edda Lisboa Leite - Profa.Dra./Orientadora – Depto. de Bioquímica - UFRN

INTRODUÇÃO:

A alga marrom Lobophora variegata,pertencente a divisão Phaeophyta e crescem em substratos rochosos ou crostas calcárias sendo encontrados em mares tropicais à temperados. Algas possuem polissacarídeos sulfatados capazes de produzir grande variedade de metabolitos secundários e por isso são consideradas ricas fontes de compostos bioativos estruturalmente diversos. As diversas propriedades e características químicas encontradas nesses polissacarídeos sulfatados estão relacionadas com a diversidade estrutural,grau de ramificação,disposição espacial, tamanho molecular e interação entre grupamentos. Os polissacarídeos de algas vêm despertando particular interesse devido a sua potencial aplicação biotecnológica e farmacológica. Acredita-se que a atividade biológica desses polissacarídeos está relacionada ao seu conteúdo de sulfato,composição monossacarídica,peso molecular e estrutura da cadeia de polímero principal. Várias atividades biológicas foram atribuídas às fucoidanas como ativação plaquetária, anticoagulante, antitrombótica, antivirais, antioxidante, anticancerígenos, anti-inflamatório, respostas imunológicas e antivirais. Assim, as algas, por possuírem uma grande variedade estrutural, estes polissacarídeos apresentam diversas propriedades biológicas e farmacológicas.

OBJETIVO DO TRABALHO:

A partir da extração e fracionamento dos polissacarídeos Lobophora variegata, caracterizar alguns aspectos químicos das frações polissacarídicas sulfatadas tais como de proteínas totais, açúcares, sulfato, perfil eletroforético, composição monossacarídica e espectroscopia de infravermelho, além de analisar a ação da Fração 0,8 na hipersensibilidade por contato em ratos Wistar.

MÉTODOS:

A alga foi secada, pulverizada e tratada quatro vezes com dois volumes de acetona para despigmentação e delipidação do material. As proteínas totais foram determinadas segundo o método de Bradford (1976); os açúcares totais foram determinados pelo método do fenol/ácido sulfúrico; os teores de sulfato total foram obtidos com hidrólise ácida (HCl 6 N, 6 horas, 100ºC) por turbidimetria pelo método de gelatina-bário; a eletroforese em gel de agarose foi realizada segundo o método de Dietrich (1977); a cromatografia das frações (F0,3, F0,5 e F0,8) de L. variegata foi realizada no sistema de solvente, ácido isobutírico: amônia 1,0 N (5:3) v/v; a espectroscopia de infravermelho foi analisados após secagem sob a forma de pastilha de KBr, de 4000 a 400 cm-1 por transmitância. A reação de hipersensibilidade por contato é uma indução de óleo irritante (óleo de cróton) do edema local com tratamento tópico na orelha de rato Wistar com aproximadamente dois meses de idade, obtidos do biotério do Departamento de Bioquímica – UFRN. A histologia foi realizada em tecido fixado em formaldeído 10% por 5 dias, embebido em parafina e seccionado. Os resultados foram submetidos à análise de variância ANOVA e teste de Tukey-Kramer.

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

As frações 0,3 0,5 e 0,8 tiveram rendimento em peso total de 2,1%, 2,7% e 16,5% respectivamente. As análises químicas das mesmas frações em porcentagem foram 0,2±0,03, 0,42±0,09 e 0,18±0,06 para proteínas totais, 26,2±0,09, 29,4±0,09 e 44,5±0,12 para açucares totais e 26,4±1,8, 36,6±2,5 e 29,5±2,3 para sulfato, respectivamente. A Fração 0,8 mostrou um perfil metacromático polidisperso no corante azul de toluidina. A composição monossacarídica revelou a presença de glicose e/ou galactose, xilose, fucose e traços de manose e ácido glucurônico. A espectroscopia de infravermelho revelou uma banda larga centrada em torno de 3500 cm-1, cujo sinal é característico da banda de estiramento axial de OH, região na qual ocorre a maior contribuição de carboidratos presentes na amostra. Enquanto as absorções a 1258 e 848 cm-1 são absorções que confirmaram a presença dos grupos sulfatos no polímero. Os resultados obtidos na reação inflamatória mostraram que o óleo de cróton produziu edema no grupo de animais tratados, com características histológicas bem definidas de um processo inflamatório denso com infiltração de neutrófilos. As fucanas de Lobophora variegata reduziram o processo edematoso de maneira dose-dependente, sendo a dose de 75 mg/kg a de efeito mais significativo.

CONCLUSÕES:

A alga marrom apresenta diferentes frações de polissacarídeos quando fracionada com diferentes volumes de acetona; As análises colorimétricas mostram que a Fração 0,8 da alga Lobophora variegata apresenta altos teores de açúcares totais e sulfato e baixa taxa de contaminação protéica; As frações 0,3v; 0,5v e 0,8v de Lobophora variegata apresentaram perfil metacromático polidisperso e o mesmo perfil de composição monossacarídica constituindo-se pela presença de glicose e/ou galactose, xilose, fucose, traços de manose e ácido glucurônico; A ação da Fração 0,8 de Lobophora variegata sobre a reação de hipersensibilidade por contato foi confirmada pela dose-dependência observada com redução do edema. Esta fração polissacarídica apresentou pelas lâminas histológicas observadas uma diminuição significativa no recrutamento de células para o local da inflamação. Estes resultados sugerem que a fração estudada (F0,8) tem atividades anti-inflamatórias. Os efeitos inibitórios da presente fucana na hipersensibilidade de tipo retardada demonstraram que a medicação pode ser potencial para doenças inflamatórias crónicas no futuro.

Palavras-chave: Polissacarídeos sulfatados, Análises químicas, Reação por contato.