65ª Reunião Anual da SBPC

A. Ciências Exatas e da Terra - 4. Química - 3. Química Analítica

ESTUDO COMPARATIVO DE METODOLOGIAS PARA DETERMINAÇÃO EM FLUXO DE PROTEÍNA TOTAL EM SORO DE LEITE

Maria Cristhiany Menezes Albuquerque - Depto. de Química e Biologia - UEMA Rubervania Santos de Oliveira - Depto. de Química e Biologia - UEMA Maria de Fátima de Castro Oliveira - Depto. de Química e Biologia - UEMA Elizabeth Nunes Fernandes - Profa. Dra./Orientadora - Depto. de Química e Biologia - UEMA

INTRODUÇÃO:

O leite apresenta-se como uma emulsão líquida em que a fase contínua é formada de água e substâncias hidrossolúveis ao passo que a fase interna ou descontínua é formada, principalmente, de micelas de caseína e de glóbulos de gordura. Por este motivo o mercado de alimentos de gênero lácteos com propriedades funcionais está em crescente expansão, apoiado por evidências científicas, que creditam o desenvolvimento de alimentos diferenciados. Ganhando com isso um espaço no mercado de produtos inovadores, as bebidas especiais para esportistas à base de soro de leite, também conhecidas como whey protein. As proteínas totais do leite são representadas por 20% de proteínas do soro e 80% de caseínas. O sistema análise em fluxo (FIA) utilizado neste trabalho foi proposto pela primeira vez no Brasil por Ruzicka e Hansen em 1975. Análise por injeção em fluxo tem como conceito básico a inserção da amostra em um fluxo carregador que transporta a mesma até o detector. Inicialmente a injeção da amostra era feita empregando uma seringa hipodérmica o que deu origem ao nome do processo, do inglês “Flow Injection Analysis” (FIA). Adotada a grande importância de produtos derivados do leite, aliou-se métodos espectrofométricos relatados na literatura à análise em fluxo.

OBJETIVO DO TRABALHO:

O presente estudo, objetivou-se avaliar e determinar o teor proteico em soro do leite de diferentes origens: in natura, pasteurizado e UHT (Ultra-high temperature).

MÉTODOS:

Após a obtenção das amostras de leite, identificação e armazenamento, iniciou-se o processo de obtenção e preparo das amostras. A obtenção do soro de leite assim como o procedimento para a determinação de proteína total foi feita empregando procedimento recomendado na literatura. Amostras de soro do leite foram preparadas a partir de 200 mL de leite bovino aquecido a 45ºC, aos quais serão adicionados 10,0 mL de ácido acético P.A., para precipitação total da caseína. Após filtração da caseína em papel de filtro, o soro foi centrifugado a 6000 rpm por 30 min e utilizado para determinações de proteína. Utilizaram-se os métodos Biureto e Bradford para a determinação da proteína total em amostras de soro do leite. Para encontrar as melhores condições operacionais para o sistema foi necessário à otimização de cada método utilizando um módulo de análise. Foram analisadas um total de 10 amostras, obtidas no comércio local, sendo 2 amostras de leite in natura, 3 amostras de leite pasteurizado e 5 amostras de leite UHT (Ultra-high temperature). Para a determinação de proteína nas amostras, inicialmente, construiu-se uma curva analítica para cada método estudado.

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

Foram obtidas curvas de calibração para os métodos empregados, que apresentaram faixa de concentração de proteína diferentes. O método do Biureto foi linear na faixa de concentração de 0,2 a 1% (m/v) de proteína; e o método de Bradford, foi linear na faixa de concentração de 5x10-4 a 2,5x10-3% (m/v) de proteína. As amostras foram analisadas em replicadas, com n = 7. Aos resultados dos teores de proteína encontrados foram aplicados testes estatísticos como o teste F e teste t-Student em nível de confiança 95%. Os resultados do t-Student revelaram que os teores de proteína obtidos com os métodos Biureto e Bradford diferem estatisticamente, sugerindo que não devem ser comparados, pois existe diferença significativa entre os dois métodos. Notou-se uma variação dos teores na faixa de 0,2 a 1,5% (m/v ou g/100mL) de proteína total para valores obtidos pelo método Biureto. Dentre os métodos analisados, o método Bradford apresentou informações na faixa de 0,8 a 1,7% (m/v ou g/100 mL) de proteína total no soro do leite, estes resultados também estão dentro dos padrões de valores encontrados na literatura, tanto nos encontrados em trabalhos anteriores como na legislação em vigor.

CONCLUSÕES:

O sistema em fluxo empregado demonstrou ser apto para o qual foi proposto, como: mecanizar os procedimentos de análises, reduzindo o envolvimento do operador, melhorando a precisão e aumentando o número de amostra, reduziu os gastos com reagentes. No que se diz respeito aos métodos Biureto e Bradford, para determinação de proteína, verificou-se que os mesmos apresentaram distintas sensibilidades e faixa de concentração linear. Aplicando-se os testes estatísticos, frequentemente empregados na química analítica para comparação de metodologias analíticas, para análise dos resultados obtidos neste trabalho, verificou-se que existe diferença significativa entre os dois métodos em nível de confiança de 95% (n= 10). Portanto, seus resultados não se equivalem estatisticamente.

Palavras-chave: Análise por injeção em fluxo, Biureto, Bradford.