65ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 5. Química de Macromoléculas

PURIFICAÇÃO PARCIAL DE UMA LECTINA EXTRAÍDA DE SEMENTES DE Sterculia foetida

Alana Araújo Braga - Depto. de Biologia Molecular-UFPB Gracy Kelly Vieira Vasconcelos - Depto. de Biologia Molecular-UFPB Whyara Karoline Almeida da Costa - Depto. de Biologia Molecular-UFPB Paula Perazzo de Sousa Barbosa - Depto. de Biologia Molecular-UFPB Carlos Alberto Almeida Gadelha - Depto. de Biologia Molecular-UFPB Tatiane Santi Gadelha - Profa. Dra./Orientadora - Depto. de Biologia Molecular-UFPB

INTRODUÇÃO:

Sterculia foetida é uma planta pertencente à família Sterculiacae, conhecida popularmente no Brasil como chichá-fedorento. Inúmeros estudos vêm sendo desenvolvidos a partir do óleo extraído das sementes, mas até o presente momento pouco se sabe sobre a presença de lectinas. Essas proteínas são definidas como uma classe de proteínas que possuem a capacidade de ligar-se reversivelmente a carboidratos de forma altamente específica sem alterar a estrutura do ligante glicosil, e devido a essa habilidade têm se destacado como importantes ferramentas em pesquisas englobando diversas áreas da ciência. Estudos demonstram que lectinas apresentam atividade antibacteriana, antifúngica, inseticida e antitumoral. Dessa forma, a purificação de novas lectinas fornece uma lógica para sua posterior utilização como ferramenta farmacológica e consequente uso como um agente terapêutico.

OBJETIVO DO TRABALHO:

Detectar e purificar uma lectina de sementes deSterculia foetida, abrindo possibilidades de sua utilização como ferramenta biotecnológica.

MÉTODOS:

As proteínas solúveis presentes na farinha de sementes de Sterculia foetida foram extraídas em solução Tris-HCl 0,1M pH 7,4 contendo NaCl 0,15M, sob agitação constante, durante 30 minutos à temperatura de 25˚C. A suspensão obtida foi centrifugada a 5.000 g a 4ºC por 30 minutos. A atividade hemaglutinante foi determinada por diluição duplo-seriada do extrato lectínico em NaCl 0,15 M com adição de igual volume de hemácias de coelho a 3% (nativas e tratadas enzimaticamente com papaína, tripsina e bromelaína). A dosagem de proteínas solúveis foi determinada segundo Bradford (1976) usando a albumina sérica bovina como padrão. O extrato total foi submetido a fracionamento proteico através da adição lenta, de sulfato de amônio em diferentes concentrações, correspondendo as frações 0-30 %, 30-60 % e 60-90 % de saturação. A fração 0-30 %, foi submetida à cromatografia de troca iônica de matriz DEAE Sephacel(1,0 x 10,0 cm). A eletroforese em gel de poliacrilamida foi realizada utilizando-se a técnica descrita por Laemmili (1970).

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

Os extratos proteicos de sementes de Sterculia foetida apresentaram atividade hemaglutinante contra eritrócitos de coelho tratados com enzimas proteolíticas ou nativos, mas não contra eritrócitos humanos do sistema ABO, sendo que seu maior título de hemaglutinação foi observado contra eritrócitos de colho tratados nativos e tratados com tripsina (256 U.H.). Foi observado que o tampão Tris 0,1M pH 7,4 com NaCl 0,15M extraiu um grande teor de proteínas solúveis por grama de farinha (222,2 mgP/gF) e que o extrato resultante apresentou uma alta atividade específica (23,04 UH/mgP). A atividade hemaglutinante presente nos extratos de sementes de S. foetida não foi inibida por nenhum açúcar. A atividade hemaglutinante se concentrou na fração 0 – 30 % e esta fração foi utilizada para a cromatografia de troca iônica em DEAE-Sephacel. Após a eluição do material retido, as proteínas que ficaram retidas na coluna DEAE sephacel foram eluídas com gradiente salino de NaCl , as quais apresentaram atividade hemaglutinante. O processo de purificação de SFL foi monitorado por SDS-PAGE, demonstrando uma purificação parcial.

CONCLUSÕES:

Foi detectada a presença de uma lectina em sementes deSterculia foetida, a qual apresentou atividade hemaglutinante contra eritrócitos de coelho nativos e não contra eritrócitos humanos. A lectina em questão foi purificada parcialmente através de cromatografia de troca iônica DEAE-Sephacel. Mais estudos precisam ser desenvolvidos para obtenção de seu isolamento total, bem como para a determinação das suas atividades biológicas.

Palavras-chave: Sementes, Cromatografia, Atividade Hemaglutinante.