66ª Reunião Anual da SBPC

Resumo aceito para apresentação na 66ª Reunião Anual da SBPC pela(o): SBPC - SOCIEDADE BRASILEIRA PARA O PROGRESSO DA CIÊNCIA

D. Ciências da Saúde - 5. Farmácia - 1. Farmácia

ESTUDOS DE PRÉ-FORMULAÇÃO DE FÁRMACOS UTILIZADOS NA TERAPIA DA DOENÇA DE CHAGAS

Marcilio Sergio Soares Cunha Filho - Universidade de Brasilia Carlos Martins Infante - Universidade de Brasilia Ludmila Alvim Gomes Pinho - Universidade de Brasilia

INTRODUÇÃO:

A doença de Chagas, descoberta em 1909 pelo médico brasileiro Carlos Chagas, é um dos principais problemas socioeconômicos enfrentados na América Latina. Essa doença, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, afeta cerca de 18 milhões de pessoas, do sul dos Estados Unidos até a Patagônia. Existem atualmente duas terapias medicamentosas para a eliminação do parasita – Benznidazol (BZN) e Nifurtimox. O BZN é o fármaco de escolha para o tratamento da doença de Chagas e o único comercializado no Brasil. O tratamento com BZN se estende por período de 60 dias ininterruptos, em três doses diárias. O tratamento prolongado provoca uma série de efeitos adversos e grande desconforto para o paciente, que culminam com o abandono da terapia no estado crônico assintomático. Além disso, a atividade antiparasitária do fármaco é insuficiente na fase crônica, na qual menos de 80% dos pacientes tratados são curados parasitologicamente. Estudos recentes têm demonstrado o efeito sinérgico do fármaco BNZ, e de derivados azólicos, como o Itraconazol (ITZ), indicando que a quimioterapia combinada para tratar a doença de Chagas pode ser um caminho promissor a seguir.

OBJETIVO DO TRABALHO:

O presente trabalho teve como objetivo desenvolver e validar um método analítico espectrofotométrico para quantificação simultânea dos fármacos itraconazol e benznidazol a ser utilizado no controle de qualidade de formulações desenvolvidas com esses fármacos.

MÉTODOS:

Para quantificação simultânea dos fármacos, um modelo matemático foi proposto utilizando metodologia de calibração multivariada. O estudo foi realizado em um espectrofotômetro Perkin Elmer Lambda XLS. O modelo foi proposto a partir das absortividades molares de cada fármaco definida pela relação entre a concentração e a absorbância conseguida pelas curvas de calibração realizadas, considerando a absortividade como o coeficiente angular da reta. Amostras de 15 mg de cada um dos fármacos foram utilizadas para preparar uma solução estoque na concentração de 150 µg/mL. Diluições a partir das soluções estoque de cada fármaco foram efetuadas utilizando etanol puro e etanol/HCl 0,2M 70:30 para o BNZ e ITZ, respectivamente. A concentração nominal foi estabelecida em 17,5 µg/mL. As absorbâncias das amostras foram medidas nos comprimentos de onda de 321 nm e 259 nm. Os parâmetros de validação avaliados foram os designados no Guia para validação de métodos analíticos e bioanalíticos, Resolução nº 899/2003 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), para métodos não-cromatográficos, a saber: robustez, linearidade, seletividade, precisão, limite de quantificação e detecção. Todos os resultados obtidos foram avaliados utilizando o software Statgraphics Centurion XVI.

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

A absortividade molar dos fármacos foi definida para cada comprimento de onda analisado, sendo 2342.7 e 8096.9 para o BZN no comprimento de onda de 259 nm e 321 nm, respectivamente. Para o ITZ as absortividades foram de 22996 pra 259 nm 137.86 para 321 nm. A partir destes dados foi proposto o sistema de equações para quantificação dos fármacos. A validação foi avaliada em diferentes ensaios, segundo a Resolução 899/2003 da ANVISA. O ensaio de robustez colocou a prova o método frente a deliberadas variações nas condições experimentais suscetíveis de ocorrer durante sua utilização. O método mostrou-se robusto quanto a variações na concentração de ácido, proporção de etanol/ácido e quanto a estabilidade química das amostras no período de 2h. A seletividade do método foi verificada a partir de análises dos fármacos sozinhos e em associação na concentração nominal. A discrepância entre os dados foi inferior a 0,1%. A linearidade para cada um dos fármacos foi submetida à análise de variância (ANOVA) comprovando homogeneidade das variâncias e normalidade dos resíduos (ITZ : F tabelado = 4,66 ; F = 1878,9 . BZN: F tabelado= 4,66; F= 1740,9). Os coeficientes de correlação encontrados para o ITZ e BZN foram de 0,997 e 0,996. Os resultados de precisão apresentaram coeficientes de variação reduzidos para repetibilidade instrumental, com valores inferiores a 0,2%. A repetibilidade do método foi utilizada para determinar o número de replicados necessários para uma determinação analítica por este método, sendo que para o ITZ o número de replicados é 3, enquanto que determinações analíticas envolvendo o BNZ exigem 5 replicados, considerando intervalo de aceitação de 97 a 103%. O método proposto apresentou limite de detecção de 0,00158 mg/mL para o ITZ e de 0,00246 mg/mL para o BNZ. O limite de quantificação foi de 0,00527 e 0,00823 mg/mL, para o ITZ e BNZ, respectivamente.

CONCLUSÕES:

O método desenvolvido foi capaz de dosear simultaneamente os fármacos BNZ e ITZ através da metodologia de quantificação multivariada. O método foi validado segundo as normas sanitárias vigentes, mostrando-se robusto, linear, preciso e seletivo. Os limites de detecção e quantificação reduzidos demonstram a sensibilidade do método em quantificar pequenas quantidades dos analitos selecionados nas amostras, permitindo que o método seja aplicado em diferentes quantificações analíticas. A quantificação de BZN e ITZ por espectrometria ultravioleta demosntrou ser uma alternativa eficiente e de baixo custo para análises quantitativas de BNZ e ITZ combinados em uma mesma forma farmacêutica.

Palavras-chave: Benzonidazol, Itraconazol, Validação.