66ª Reunião Anual da SBPC

Resumo aceito para apresentação na 66ª Reunião Anual da SBPC pela(o): SBPC - SOCIEDADE BRASILEIRA PARA O PROGRESSO DA CIÊNCIA

C. Ciências Biológicas - 2. Biologia - 1. Biologia

Caracterização mesênquimal de células tronco isoladas do tecido adiposo humano para futuras terapias regenerativas.

Priscilla Barros Delben - Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC Fernanda Rosene Melo - Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC Rogério Schützler Gomes - Hospital Ilha de Florianópolis Andrea Gonçalves Trentin - Orientadora/ Pós Doutorado em Biologia Celular e Molecular / Universidade Federal de Santa Catarina

INTRODUÇÃO:

As células tronco são amplamente estudadas para diversos fins, sendo as células tronco hematopoiéticas e mesenquimais as mais adequadas para as aplicações em terapias regenerativas in vivo. O tecido adiposo é uma promissora fonte de células tronco mesenquimais, pela facilidade de acesso e a porcentagem constitucional elevada de CTMs, com alta taxa de proliferação e plasticidade. Sendo assim, o desenvolvimento de protocolos eficientes de isolamento com relação à quantidade e homeogenidade das CTMs são essenciais para a sua aplicação nas terapias regenerativas. Entretanto, a utilização das células tronco depende de um eficiente protocolo de isolamento e expansão em cultura.

OBJETIVO DO TRABALHO:

O objetivo deste trabalho é estabelecer um protocolo eficiente para o isolamento e cultivo de células com perfil de células tronco do tecido adiposo humano.

MÉTODOS:

Foram utilizados excedentes de lipoaspirados de 3 pacientes e realizado lavagens destes com solução salina PBS 1x e precedido de dissociação enzimática pela colagenase I. Em seguida, as células foram cultivas em garrafas de 25 cm2 contendo meio DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino, em atmosfera úmida com temperatura de 37 C º e 5% CO. Para a avaliação do potencial mesênquimal das células verificou-se a presença das características: Morfologia fibroblastóide e aderência ao plástico; dos marcadores CD73, CD90 e CD105 pelo teste de citometria de fluxo; expressão dos fatores de transcrição Nanog, Oct-4 e Sox-2, visualizados pelo ensaio de imunocitoquímica; e capacidade de diferenciação celular para os fenótipos osteocíticos e adipocíticos após o uso de meios indutores de diferenciação, sendo aplicado o ensaio de coloração com Alizarin Red e Oil Red para verificar os fenótipos, respectivamente. A viabilidade celular foi avaliada pelo ensaio de MTT, realizado antes e após a diferenciação celular.

RESULTADOS E DISCUSSÃO:

Os resultados obtidos demonstraram a presença da morfologia fibroblástóide e a aderência ao plástico, dos marcadores CD73, CD90, CD105, Nanog, Oct-4, Sox-2 e a diferenciação para os fenótipos adipocítcos e osteocíticos. O resultado do teste do MTT não indicou diferencias significativas na viabilidade celular antes e após a indução da diferenciação celular. Os resultados de microscopia de contraste de fase revelaram o isolamento de uma população celular fibroblastóide e aderente ao plástico. Os ensaios de citometria de fluxo demonstraram que mais de 90% das células expressavam marcadores de células tronco mesenquimais CD73, CD90 e CD105 e que 99% destas não apresentaram os marcadores CD34 e CD45, característicos de células hematopoiéticas, indicando pouca contaminação de células sanguíneas, provenientes de vasos sanguíneos do tecido adiposo (DOMINICI, 2006). Além disso, foi visualizada a expressão dos fatores de transcrição de células indiferenciadas Nanog, Sox-2 e Oct-4 nas células analisadas por imunocitoquímica. A expressão destes fatores está relacionada à manutenção do estado indiferenciado, quando estes diminuem inicia-se o processo de diferenciação celular (BOYER et al., 2005). Dessa forma, foram obtidos resultados que alcançaram os requerimentos mínimos determinados pelas Sociedade Internacional de Terapia Celular para a obtenção em cultura in vitro de células tronco mesenquimais. (HORWITZ E. M, et al, 2005; DOMINICI, 2006)

CONCLUSÕES:

Os resultados demonstram que a metodologia implementada neste estudo foi eficiente para o isolamento e cultivo das células com perfil de células tronco do tecido adiposo humano. Portanto, concluímos que o protocolo realizado seja eficiente para obtenção e cultivo de células tronco mesenquimais viáveis isoladas do tecido adiposo humano.

Palavras-chave: células tronco, tecido adiposo, caracterização.