Reunião Regional da SBPC em Tabatinga - Tabatinga / AM - 2009

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 3. Enzimologia

DETERMINAÇÃO DA ENZIMA β-GLICOSIDASE NO FUNGO Pycnoporus sanguineus EM DIFERENTES MEIO DE CULTURA E PH

Jorge Pontes Koide1 Cynara da cruz carmo1 Ademir Castro e Silva1 Paulo Roberto Serrão Soares1 Andrey Azedo Damasceno1 Maria Dolores Fonseca1

1. UEA

INTRODUÇÃO:

Alguns fungos filamentosos têm em comum a habilidade de produzir enzimas extracelulares que oxidam compostos fenólicos relacionados à lignina e são particularmente úteis na bioconversão da madeira, como por exemplo, no pré-tratamento biológico de cavacos de madeira na indústria de papel e celulose, o que permite a economia de energia no processo mecânico e termomecânico de produção de pasta celulósica (CASTRO E SILVA, 2001;2002). Reis et. al. (2001), demonstrou que algumas enzimas, entre elas as celulases, reúnem propriedades que indicam seu potencial de uso na alimentação animal. Eles avaliaram as propriedades bioquímicas de quatro celulases recombinantes e, concluíram que apresentam perfil de atividade que indicam seu potencial de uso na suplementação de dietas para frangos. Este fungo possui um “pool” enzimático que de acordo com Castro e Silva et al, (1993), que estudaram uma cepa amazônica deste fungo, passa pela produção em meio “agar-malte” de lignina-peroxidase, peroxidase, lacase- Mn-peroxidades, b-glicosidase, celulase e xilanase. Portanto, dada a importância industrial de fungos como o Pycnoporus sanguineus, buscou-se através deste projeto estudar a produção enzimática do referido fungo, através da determinação da enzima b-Glicosidase.

METODOLOGIA:

A linhagem utilizada neste estudo foi a de Pycnoporus sanguineus coletada nas serrarias e em áreas ao redor de Parintins. Meio de cultura para otimização: Para otimização do meio de cultura, foram utilizados o meio Sabourand 4% e meio Agar-malte + Dextrose e meio BDA. Quantificação do Crescimento Fúngico: Segundo metodologia proposta por Bettucci & Guerrero (1971), foi realizada uma medição diária para cada meio de cultura a intervalo regular de 24 horas, durante sete (07) dias após crescimento micelial. Determinação Enzimática: O fungo foi inoculado em meio malte líquido com glicose como fonte de carbono. Amostras de 2 mL do meio de cultivo (caldo filtrado) foram consideradas como fonte enzimática, essas amostras foram coletadas no 2°, 4°, 6°, 8°, 10° e 12° dias para observação do período de maior produção enzimática. b-Glicosidase:

RESULTADOS:

Em condição estacionária não houve produção enzimática para b-Glicosidase, mesmo quando foi acrescentado glicose como fonte de carbono. No entanto, em condições de agitação observou-se atividade desta enzima. Nossos resultados concordam com o apresentado por Castro e Silva et al. (1993) no que diz respeito ao uso de um "pool" enzimático, por estes fungos, para penetrar na matriz "amorfa" que compreende a parede celular do tecido xilemático. Nas condições de crescimento descritas o fungo estudado mostrou preferência por meio ácido (pH ótimo 5,0) e temperatura ótima na faixa de 30-35 °C. A β-glicosidase, uma enzima produzida em quantidades elevadas pela maioria dos fungos celulolíticos (Woodward & Wiseman, 1982), esteve presente em maior quantidade em meio malte. A atividade β-glicosidase sob condição estacionária, meio malte com glicose como fonte de carbono é mostrada no gráfico abaixo, onde é possível observar que esta enzima teve um pico de ativação máximo no quinto dia.

CONCLUSÃO:

A maior atividade β-glicosidase do fungo Pycnoporus sanguineus foi obtida no quinto dia. Os resultados obtidos confirmam a hipótese de que o fungo testado apresenta potencial hidrolítico. Face ainda aos resultados obtidos pode-se acrescentar a necessidade de novos estudos no que se refere a possíveis indutores para maximização da atividade enzimática, visando viabilizar a purificação para usos biotecnológicos.

Instituição de Fomento: FAPEAM

Trabalho de Iniciação Científica

Palavras-chave: FUNGO, ENZIMA